高考-法醫師法醫生物學106 年第 13 題單選題
關於 SNaPshot（minisequencing）分析之敘述，下列何者正確？
A通常螢光會被標識在 dNTP
B通常螢光會被標識在 ddNTP正確答案
C通常螢光會被標識在 SNP extension primer
D通常進行變異區複製之 PCR 產物即已被標識螢光
B正確答案
SNaPshot 是單鹼基延伸法，螢光標定在 ddNTP 上，延伸一個鹼基後即終止。
為什麼答案是 B
SNaPshot 使用四種不同螢光標定的 ddNTP（A/T/C/G 各一色），primer 3' 端延伸一個 ddNTP 後因缺 3'-OH 而終止，藉螢光顏色判讀 SNP 型別。
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完整詳解
Pro · 無限重點 SNaPshot 是單鹼基延伸法，螢光標定在 ddNTP 上，延伸一個鹼基後即終止。
記關鍵字：mini-sequencing 只延伸 1 個鹼基 → 用 ddNTP 終止 → 螢光在 ddNTP。
逐選項分析
A✕ 陷阱
dNTP 是正常延伸用的核苷酸，不會終止反應，SNaPshot 不使用 dNTP 作為螢光標定對象，否則無法單鹼基辨識。
B✓ 正確
SNaPshot 使用四種不同螢光標定的 ddNTP（A/T/C/G 各一色），primer 3' 端延伸一個 ddNTP 後因缺 3'-OH 而終止，藉螢光顏色判讀 SNP 型別。
C✕ 陷阱
SNP extension primer 本身不帶螢光，僅用長度（poly-dT 尾）區分不同 SNP 位點，螢光訊號來自延伸上去的 ddNTP。
D✕
前置 PCR 僅為擴增含 SNP 位點的 DNA 模板，產物本身不帶螢光；螢光是在後續 mini-sequencing 反應中才加入。
SNaPshot 反應組成
| 成分 | 角色 | 是否帶螢光 | 備註 |
|---|
| Extension primer | 3' 端停在 SNP 前一個鹼基 | 否 | 以長度區分不同 SNP |
| ddNTP (A/T/C/G) | 延伸一個鹼基即終止 | ✅ 四色螢光 | 核心標定對象 |
| DNA polymerase | 催化延伸 | 否 | 通常用 AmpliTaq FS |
| PCR 模板 | 含 SNP 區域之產物 | 否 | 需先純化去除 dNTP |
考生易把螢光標定位置搞混，誤以為螢光在 primer 或 PCR 產物上。關鍵在於 SNaPshot 原理就是「單鹼基延伸並終止」，故螢光必須在終止鹼基 ddNTP 上，才能知道延伸進去的是哪一個鹼基。 
