高考-法醫師法醫生物學109 年第 24 題單選題
以毛細管電泳進行 STR 型別分析時，使 STR DNA 之 PCR 產物標識（label）螢光染料之最常見方法為下列何者？
A使用 Fluorescent intercalating dye
B使用標識螢光染料之 dNTP
C使 PCR 引子（Primer）之 5'端標識螢光染料正確答案
D使 PCR 引子（Primer）之 3'端標識螢光染料
C正確答案
STR 毛細管電泳分析最常用『5′端螢光標記引子』法，讓 PCR 產物帶螢光便於偵測。
為什麼答案是 C
將螢光染料標記於 PCR 引子的 5′ 端，是 STR 型別分析的標準方法。5′ 端不影響 Taq DNA 聚合酶的延伸，且每條產物僅含一個螢光分子，訊號定量精確。
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完整詳解
Pro · 無限重點 STR 毛細管電泳分析最常用『5′端螢光標記引子』法，讓 PCR 產物帶螢光便於偵測。
記口訣：『引子 5′ 掛螢光』→ 3′ 端若標記會阻礙延伸，故一定選 5′。
逐選項分析
A✕ 陷阱
嵌入型螢光染料（如 EtBr、SYBR Green）會非專一地結合所有雙股 DNA，無法區分不同 STR 基因座，不適合多重 STR 型別分析。
B✕
雖然技術上可用螢光 dNTP，但會造成每條產物標記強度不一、訊號不穩，且成本高，並非 STR 分析的常規做法。
C✓ 正確
將螢光染料標記於 PCR 引子的 5′ 端，是 STR 型別分析的標準方法。5′ 端不影響 Taq DNA 聚合酶的延伸，且每條產物僅含一個螢光分子，訊號定量精確。
D✕ 陷阱
3′ 端是 DNA 聚合酶延伸的起始點，若在此標記螢光染料會阻斷延伸反應，使 PCR 無法進行，絕對不可使用。
STR-PCR 螢光標記方法比較
| 方法 | 原理 | 優缺點 | 是否常用 |
|---|
| 5′端標記引子 | 螢光分子接在引子 5′端 | 專一、定量準、多色可行 | ✅ 標準法 |
| 3′端標記引子 | 螢光接在延伸起點 | 阻斷聚合酶，無法延伸 | ❌ 不可用 |
| 螢光 dNTP | 延伸時隨機嵌入 | 訊號不穩、成本高 | ❌ 少用 |
| 嵌入型染料 | 與雙股 DNA 結合 | 非專一，無法區分基因座 | ❌ 不用於分型 |
C 與 D 只差一個方向字（5′ vs 3′），是最經典陷阱。務必記住：DNA 聚合酶從 3′端延伸，所以 3′端絕不可被螢光堵住，標記一定在 5′端。考選部最愛考這種方向性細節。 
