高考-法醫師法醫生物學104 年第 17 題單選題
下列關於以毛細管電泳分析STR基因產物出現異常訊號之描述,何者較為合理?
Astutter訊號通常出現在比對偶基因型多一個重複單位之處
B裂解的DNA模版容易出現pull-up
CF-spike之螢光雜訊有可能來自於formamide正確答案
D出現dye-blobs之螢光雜訊,只要再進行一次電泳分析即可排除
C正確答案
毛細管電泳 STR 分析中,F-spike 螢光雜訊來源之一為變質的 formamide,為合理描述。
為什麼答案是 C
F-spike(尖峰雜訊)可能來自變質或含雜質的 formamide、尿素結晶、電壓不穩或毛細管內氣泡等。由於 formamide 會分解產生離子影響電泳,為合理的雜訊來源描述。
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完整詳解
Pro · 無限重點 毛細管電泳 STR 分析中,F-spike 螢光雜訊來源之一為變質的 formamide,為合理描述。
記住四大雜訊來源:stutter(-1重複)、pull-up(訊號過強)、spike(尿素/formamide)、dye-blob(染料脫落需過濾管柱)。
逐選項分析
A✕ 陷阱
stutter 訊號通常出現在比對偶基因型「少一個」重複單位之處(n-1),而非多一個。這是 Taq 聚合酶在複製重複序列時的 slippage 現象,方向性很固定。
B✕
裂解(degraded)的 DNA 模版容易造成大片段 locus 訊號下降或 allele dropout,並非 pull-up。pull-up 是因某一螢光訊號過強溢出到其他顏色頻道所致,與 DNA 品質無關。
C✓ 正確
F-spike(尖峰雜訊)可能來自變質或含雜質的 formamide、尿素結晶、電壓不穩或毛細管內氣泡等。由於 formamide 會分解產生離子影響電泳,為合理的雜訊來源描述。
D✕ 陷阱
dye-blobs 為染料自 primer 上脫落造成的雜訊,無法單純重跑電泳排除,需以管柱純化(spin column)或乙醇沉澱去除游離染料後再分析。
毛細管電泳 STR 常見異常訊號
| 訊號類型 | 出現位置/特徵 | 主要成因 | 解決方式 |
|---|
| Stutter | 真實 allele 前 n-1 重複單位 | Taq polymerase slippage | 依比例閾值判讀 |
| Pull-up | 不同色頻同一位置 | 訊號過強溢到其他通道 | 稀釋樣本重跑 |
| F-spike | 尖銳單一 peak | formamide 變質、氣泡、電壓 | 更換試劑/重跑 |
| Dye-blob | 寬鈍波峰 | 游離染料自 primer 脫落 | 管柱純化去除游離染料 |
A 選項把 stutter 的 n-1 偷換成「多一個」重複單位;D 選項把需要純化處理的 dye-blob 偷換成「重跑就能解決」。這兩個都是把正確概念的關鍵細節反向或簡化,是 STR 分析常見陷阱。