高考-法醫師法醫生物學114 年第 38 題單選題
為了避免不同 STR 標記的 PCR 產物重疊難以區分（例如：D7S820 與 CSF1PO），通常會進行一些處理。下列處理方式何者錯誤？
A在引子 5'-端標記不同顏色的螢光分子，如：6FAM™, VIC™或 NED™
B在引子 5'-端加入移動修改物（mobility modifier），例如：非核苷酸銜接子（non-nucleotide linker）hexaethyleneoxide（HEO）
CHEO 可造成約 5 個核苷酸的距離移動正確答案
DHEO 的插入位置在螢光分子與引子序列之間
C正確答案
多重 STR PCR 以螢光顏色區分，HEO 移動修飾子則可改變片段電泳遷移位置，每個 HEO 約造成 2-2.5 個核苷酸的移動，非 5 個。
為什麼答案是 C
錯誤！每個 HEO（六乙二醇）單位所造成的電泳遷移差距約等同於 2～2.5 個核苷酸，並非 5 個核苷酸。考題利用具體數字誤導，是典型的「數值偷換」陷阱。
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完整詳解
Pro · 無限重點 多重 STR PCR 以螢光顏色區分，HEO 移動修飾子則可改變片段電泳遷移位置，每個 HEO 約造成 2-2.5 個核苷酸的移動，非 5 個。
記：HEO 一個約移動「2 個 nt」左右，不是 5 個。選項說 5 個就是錯的。
逐選項分析
A✕
多重 STR 分析（multiplex PCR）常在引子 5'-端標記不同螢光（如 6FAM、VIC、NED），讓毛細管電泳時即使片段長度重疊，也可藉不同螢光通道分辨。此敘述正確。
B✕
當兩個 STR 標記（如 D7S820 與 CSF1PO）片段大小範圍重疊且用相同螢光時，可在引子 5'-端加入非核苷酸銜接子 HEO（hexaethyleneoxide）作為移動修飾子，使產物電泳位置錯開。敘述正確。
C✓ 正確
錯誤！每個 HEO（六乙二醇）單位所造成的電泳遷移差距約等同於 2～2.5 個核苷酸，並非 5 個核苷酸。考題利用具體數字誤導，是典型的「數值偷換」陷阱。
D✕
HEO 作為銜接子，其插入位置在 5'-端螢光分子與下游引子序列之間，這樣既能保留引子與模板的黏合能力，又能增加 PCR 產物的有效電泳長度。敘述正確。
STR 多重 PCR 產物區分策略
| 策略 | 原理 | 工具/物質 | 效果 |
|---|
| 螢光標記 | 不同螢光波長分離偵測 | 6FAM、VIC、NED、PET | 同長度片段可分辨 |
| 片段長度設計 | 調整引子位置錯開大小範圍 | primer 設計 | 電泳位置不重疊 |
| 移動修飾子 | 加入非核苷酸銜接子延長遷移 | HEO（約 2-2.5 nt/單位） | 微調電泳位置 |
命題者把 HEO 造成的遷移距離由「約 2-2.5 個核苷酸」改寫為「5 個核苷酸」。考生若只記得 HEO 是移動修飾子卻沒記住量化數值，就會輕易放過 C 選項。法醫生物學此類技術細節題常以具體數字作為陷阱點。 
