使用 Real-Time PCR 定量儀進行絕對定量（Absolute quantification）後，應檢查各個項目或參數是否正常或符合要求，以利提供後續 PCR 實驗重要參考資料，下列敘述何者最不適當？

Question

使用 Real-Time PCR 定量儀進行絕對定量（Absolute quantification）後，應檢查各個項目或參數是否正常或符合要求，以利提供後續 PCR 實驗重要參考資料，下列敘述何者最不適當？
(A) 檢查由標準樣品（已知濃度）所建構的迴歸曲線是否正常
(B) 檢查斜率（Slope）範圍是否落在-3.0 至-3.6 之間
(C) 檢查 R2（Coefficient of determination）數值是否≥0.99
(D) 檢查 CT（Cycle threshold）數值是否≥30

Accepted Answer

正確答案為 D。 qPCR 絕對定量品管檢查：斜率、R²、標準曲線是關鍵，CT 值≥30 反而代表模板量太低，不是品管標準。 (A) 【標準曲線】標準品（已知濃度系列稀釋）建構的迴歸曲線是絕對定量的基礎，必須檢查其線性是否良好，此為標準 SOP。 (B) 【斜率/擴增效率】斜率 -3.3 對應 100% 擴增效率，可接受範圍約 -3.0 至 -3.6（效率 90-110%），是 qPCR 品管的標準指標。

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