專技高考-營養師生理學與生物化學109 年第 31 題單選題
有關蛋白質純化的親和性層析法（affinity chromatography），下列敘述何者正確？
A以分子量大小來分離純化
B以專一性結合來分離純化正確答案
C以帶電荷量的不同來分離純化
D以改變蛋白質溶解度強弱來分離純化
B正確答案
親和性層析利用蛋白質與特定配體（ligand）的專一性結合來純化目標蛋白，選擇性最高。
為什麼答案是 B
親和性層析利用目標蛋白與管柱上固定配體（如抗體、受體、受質類似物）的專一性結合，洗去雜質後以競爭性配體或改變條件將目標蛋白洗脫，純度最高。
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完整詳解
Pro · 無限重點 親和性層析利用蛋白質與特定配體（ligand）的專一性結合來純化目標蛋白，選擇性最高。
看到『affinity』就想『專一性結合』，關鍵字對上就選 B。
逐選項分析
A✕ 陷阱
以分子量大小分離的是『凝膠過濾層析』（gel filtration / size exclusion），不是親和性層析。常被拿來混淆。
B✓ 正確
親和性層析利用目標蛋白與管柱上固定配體（如抗體、受體、受質類似物）的專一性結合，洗去雜質後以競爭性配體或改變條件將目標蛋白洗脫，純度最高。
C✕ 陷阱
依帶電荷不同分離的是『離子交換層析』（ion exchange chromatography），利用陰陽離子樹脂吸附帶相反電荷的蛋白質。
D✕
改變溶解度屬於『鹽析』（salting out，如硫酸銨沉澱）或有機溶劑沉澱法，屬蛋白質初步粗純化，不是層析法。
蛋白質純化層析法四大類比較
| 方法 | 分離原理 | 常見應用 |
|---|
| 親和性層析 | 專一性結合（配體-蛋白） | His-tag、抗體純化 |
| 凝膠過濾層析 | 分子量大小 | 脫鹽、分子量估算 |
| 離子交換層析 | 帶電荷多寡 | 依 pI 分離蛋白 |
| 疏水性層析 | 疏水性強弱 | 高鹽條件下純化 |
蛋白質純化最常考「四大方法各靠什麼特性分離」。親和性層析的核心是「配體與目標蛋白像鑰匙配鎖一樣專一結合」,選擇性遠高於其他三種;凝膠過濾靠分子大小篩選、離子交換靠電荷正負吸附、鹽析則用溶解度差異沉澱。考選部最愛出「只給原理不提方法名」的題型,讓考生自己對應。判斷關鍵是抓住「專一性結合」四個字,只要看到「特定配體」「辨識特定結構」就該想到親和性層析,別被「電荷」「分子量」選項拉走。 
