關於 mutagenically separated PCR（MS-PCR），下列敘述何者最不適當？
APCR 產物只需要電泳分析，即可判讀
B反應一共使用三種引子
C引子設計突變位置在 3' 端第一個鹼基正確答案
D因為引子特殊設計，能更精準分辨正常基因與突變基因
答案與詳解
C
正確答案
MS-PCR 利用三條引物，並在 3' 端倒數第二或第三鹼基引入人工突變，以高特異性檢測單核苷酸多型性。
為什麼答案是 C
為提高特異性，MS-PCR 會在等位基因特異性引物的 3' 端倒數第二或第三個鹼基引入人工突變，而非第一個鹼基。
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完整詳解
Pro · 無限重點 MS-PCR 利用三條引物，並在 3' 端倒數第二或第三鹼基引入人工突變，以高特異性檢測單核苷酸多型性。
秒殺技巧
MS-PCR 的「mutagenically」指在 3' 端倒數第 2 或 3 個鹼基引入錯配，而非第 1 個鹼基。逐選項分析
A✕
MS-PCR 透過設計不同長度的引物，使 PCR 產物可直接經由凝膠電泳分離並判讀結果。
B✕
反應包含兩條等位基因特異性引物與一條共同引物，總共使用三種引物。
C✓ 正確
為提高特異性，MS-PCR 會在等位基因特異性引物的 3' 端倒數第二或第三個鹼基引入人工突變，而非第一個鹼基。
D✕
引入人工突變能降低非特異性放大，使引物更精準分辨正常基因與突變基因。
MS-PCR 與 ARMS-PCR 引物設計比較
| 特性 | MS-PCR | ARMS-PCR |
|---|---|---|
| 引物數量 | 3條 (2條特異性+1條共同) | 2條 (1條特異性+1條共同) |
| 3'端設計 | 倒數第2或3鹼基引入人工突變 | 3'端第1鹼基與突變位點配對 |
| 特異性 | 極高 (人工突變增加嚴格度) | 高 (依賴 Taq 酶特性) |
陷阱提醒
考題將 MS-PCR 特有的「在 3' 端倒數第二或第三個鹼基引入人工突變」偷換為「在 3' 端第一個鹼基」。3' 端第一個鹼基是用來與目標突變位點配對的，並非引入人工突變的位置。