專技高考-醫事檢驗師臨床血清免疫學與臨床病毒學109 年第 42 題單選題
免疫螢光染色時，常使用下列何者作細胞的背景染色？
AEvans blue正確答案
Bfluorescein
Crhodamine
Dacridine orange
A正確答案
免疫螢光染色中，Evans blue 作為背景對比染料，使細胞背景呈紅色，凸顯綠色螢光陽性訊號。
為什麼答案是 A
Evans blue 是常用的背景（counterstain）染料，會讓細胞或組織背景呈現紅色螢光，與 FITC 標記抗體的綠色螢光形成對比，凸顯特異性陽性訊號，正確答案。
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完整詳解
Pro · 無限重點 免疫螢光染色中，Evans blue 作為背景對比染料，使細胞背景呈紅色，凸顯綠色螢光陽性訊號。
記口訣：背景染色＝Evans blue（紅色反差），其他三者都是螢光標記/螢光素本身。
逐選項分析
A✓ 正確
Evans blue 是常用的背景（counterstain）染料，會讓細胞或組織背景呈現紅色螢光，與 FITC 標記抗體的綠色螢光形成對比，凸顯特異性陽性訊號，正確答案。
B✕ 陷阱
fluorescein（FITC）是最常用的螢光標記物，發出綠色螢光，用來標記抗體偵測目標抗原，屬於主要螢光標記而非背景染色，故錯誤。
C✕
rhodamine 是另一種螢光標記物，發出紅色/橘紅色螢光，常用於雙重螢光染色作為第二標記，並非作為細胞背景對比染色之用。
D✕
acridine orange 是核酸螢光染料，可區分 DNA（綠）與 RNA（橘紅），用於細胞核酸偵測，並非免疫螢光的背景對比染色。
免疫螢光常見染料比較
| 染料 | 螢光顏色 | 主要用途 |
|---|
| Evans blue | 紅色 | 背景對比染色 |
| Fluorescein (FITC) | 綠色 | 抗體螢光標記 |
| Rhodamine | 紅/橘紅 | 第二抗體標記(雙染) |
| Acridine orange | 綠/橘紅 | 核酸(DNA/RNA)染色 |
本題易把『背景染色』與『螢光標記物』混淆。FITC、rhodamine 是用來標記抗體偵測抗原的螢光素，acridine orange 是核酸染料；唯有 Evans blue 才是用來提供紅色背景對比、凸顯陽性綠色訊號的 counterstain。 
