專技高考-藥師(一)藥劑學與生物藥劑學109 年第 41 題單選題
有關聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction）之步驟，下列何者為正確順序？①核酸引子和DNA雜交 ②DNA被分離成兩股 ③加入DNA聚合酶以複製標的（target）的核酸序列
C正確答案
PCR 三步驟：先變性（DNA 解開成兩股）→ 黏合（引子與模板雜交）→ 延伸（聚合酶複製），正確順序為②①③。
為什麼答案是 C
②①③正確：②變性（denaturation，約 94-95°C）使雙股 DNA 分開；①黏合（annealing，約 50-65°C）引子與單股模板雜交；③延伸（extension，約 72°C）聚合酶複製標的序列。
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完整詳解
Pro · 無限重點 PCR 三步驟：先變性（DNA 解開成兩股）→ 黏合（引子與模板雜交）→ 延伸（聚合酶複製），正確順序為②①③。
記口訣「解→黏→長」：高溫先解開雙股，降溫讓引子黏上，最後聚合酶延伸複製。
逐選項分析
A✕ 陷阱
①②③錯在把「引子雜交」放最前面。引子必須在 DNA 被解開成單股後才能黏合，DNA 還是雙股時引子無法與模板配對，順序顛倒。
B✕
①③②同樣錯在開頭就引子雜交，且把變性放最後，完全違反 PCR 變性→黏合→延伸的循環邏輯，三步全亂。
C✓ 正確
②①③正確：②變性（denaturation，約 94-95°C）使雙股 DNA 分開；①黏合（annealing，約 50-65°C）引子與單股模板雜交；③延伸（extension，約 72°C）聚合酶複製標的序列。
D✕
③②①完全倒過來，把聚合酶複製放最前面。沒有單股模板與引子，聚合酶無從作用，邏輯完全錯誤。
PCR 三大步驟與溫度
| 步驟 | 英文 | 溫度 | 作用 |
|---|
| ②變性 | Denaturation | 94-95°C | 雙股DNA解開成單股 |
| ①黏合 | Annealing | 50-65°C | 引子與模板雜交配對 |
| ③延伸 | Extension | 72°C | DNA聚合酶複製標的序列 |
本題陷阱在把「引子雜交①」誤放第一步。考生若直覺認為「先有引子才能反應」就會選錯。實際上必須先高溫變性把雙股解開，引子才有單股模板可黏合，順序是②變性→①黏合→③延伸。 
