專技高考-醫事檢驗師微生物學與臨床微生物學（包括細菌與黴菌）111 年第 7 題單選題
觀察真菌細胞壁以下列何種染色方法最佳？
Acalcofluor white正確答案
Bcrystal violet
Cacridine orange
Dmethylene blue
A正確答案
Calcofluor white 會結合真菌細胞壁的幾丁質與纖維素，在螢光顯微鏡下發亮，是觀察真菌細胞壁最佳染色法。
為什麼答案是 A
Calcofluor white 是螢光染劑，會與真菌細胞壁的幾丁質(chitin)及纖維素的β-1,3、β-1,4多醣鍵結，在紫外光激發下發出明亮藍白色螢光，使真菌構造在暗背景中清晰可見，是臨床診斷黴菌的首選染色法。
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完整詳解
Pro · 無限重點 Calcofluor white 會結合真菌細胞壁的幾丁質與纖維素，在螢光顯微鏡下發亮，是觀察真菌細胞壁最佳染色法。
看到「真菌細胞壁」+「最佳染色」→ 直接選 calcofluor white（螢光染劑）。
逐選項分析
A✓ 正確
Calcofluor white 是螢光染劑，會與真菌細胞壁的幾丁質(chitin)及纖維素的β-1,3、β-1,4多醣鍵結，在紫外光激發下發出明亮藍白色螢光，使真菌構造在暗背景中清晰可見，是臨床診斷黴菌的首選染色法。
B✕ 陷阱
Crystal violet（結晶紫）是革蘭氏染色的初染劑，主要用於區分細菌的革蘭氏陽性與陰性，並非用於專一觀察真菌細胞壁，故非最佳選擇。
C✕
Acridine orange（吖啶橙）是核酸螢光染劑，會結合DNA與RNA，常用於偵測檢體中的細菌或細胞核酸，對真菌細胞壁無專一性結合，不適合觀察細胞壁構造。
D✕
Methylene blue（亞甲基藍）是一般單染劑，可大致顯示細胞形態，但對真菌細胞壁無專一性，染色對比與清晰度遠不如calcofluor white。
常見染色法用途對照
| 染色劑 | 結合目標 | 主要用途 | 是否螢光 |
|---|
| Calcofluor white | 幾丁質/纖維素 | 真菌細胞壁觀察 | 是 |
| Crystal violet | 細胞壁(肽聚醣) | 革蘭氏染色初染 | 否 |
| Acridine orange | 核酸(DNA/RNA) | 偵測微生物核酸 | 是 |
| Methylene blue | 一般細胞構造 | 簡單單染 | 否 |
兩個螢光染劑(calcofluor white與acridine orange)易混淆。關鍵在「結合目標」：calcofluor white結合細胞壁多醣(幾丁質)，acridine orange結合核酸。題目問細胞壁，故選calcofluor white。
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