專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學（包括寄生蟲學）114 年第 48 題單選題
關於限制性片段長度多型性（restriction fragment length polymorphism, RFLP）的敘述，下列何者最不正確？
A無法運用在基因甲基化位點的分析正確答案
B利用限制酶能夠辨識雙股DNA 的特定序列來做分析
C可用南方點墨法（Southern blot hybridization）分析
D可用於執行親子鑑定
A正確答案
RFLP 利用限制酶切位差異產生片段長度差異，可分析甲基化（如甲基化敏感限制酶 HpaII/MspI）、親子鑑定、Southern blot。A 最不正確。
為什麼答案是 A
最不正確。RFLP 可利用甲基化敏感限制酶（如 HpaII 遇甲基化 CCGG 不切、MspI 不受甲基化影響）比對切割差異，進行基因甲基化位點分析，是經典的 methylation-sensitive RFLP 技術。
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完整詳解
Pro · 無限重點 RFLP 利用限制酶切位差異產生片段長度差異，可分析甲基化（如甲基化敏感限制酶 HpaII/MspI）、親子鑑定、Southern blot。A 最不正確。
反向題找「錯的」：RFLP 結合甲基化敏感酶（HpaII vs MspI）正是經典甲基化分析法，A 敘述絕對。
逐選項分析
A✓ 正確
最不正確。RFLP 可利用甲基化敏感限制酶（如 HpaII 遇甲基化 CCGG 不切、MspI 不受甲基化影響）比對切割差異，進行基因甲基化位點分析，是經典的 methylation-sensitive RFLP 技術。
B✕
正確。RFLP 原理即利用限制酶（restriction enzyme）辨識雙股 DNA 特定序列（如 EcoRI 辨識 GAATTC）進行切割，因序列多型性導致切位有無差異產生長度不同片段。
C✕
正確。傳統 RFLP 分析流程：DNA→限制酶切割→電泳分離→Southern blot 轉漬→探針雜交，是標準組合技術。
D✕
正確。RFLP 是早期 DNA 指紋辨識與親子鑑定的經典方法，利用個體間切位多型性差異比對親子片段相符性，後被 STR-PCR 取代但仍屬合法應用。
RFLP 四大應用領域
| 應用 | 原理 | 搭配技術 | 是否可行 |
|---|
| 親子鑑定 | 個體切位多型性 | Southern blot | ✅ |
| 遺傳疾病診斷 | 致病突變改變切位 | PCR-RFLP | ✅ |
| 甲基化分析 | HpaII/MspI 同切位不同反應 | Southern blot | ✅（A 錯點） |
| 物種鑑定 | 種間序列差異 | PCR-RFLP | ✅ |
考生易誤以為「甲基化分析=Bisulfite sequencing 專屬」，忽略 RFLP 搭配甲基化敏感限制酶（MSRE）其實是最早的甲基化檢測方法。A 用「無法」絕對化敘述是典型錯誤陷阱。
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