專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學(包括寄生蟲學)114 年第 55 題單選題考點:螢光偵測考點:中斷子類型
關於可逆性中斷子定序法(reversible terminator-based sequencing)的敘述,下列何者最正確?
A正確配對的中斷子(terminator)不會發出螢光
B可逆性中斷子(reversible terminator)為雙去氧核苷酸(dideoxynucleotide)
C加入酸性溶液後,才可以繼續下一個鹼基的定序正確答案
D此法是運用乳化式增幅(emulsion amplification)原理
C正確答案
可逆性中斷子定序法(如 Illumina)使用帶螢光且 3' 端具阻斷基的修飾核苷酸,需加入化學試劑(切位液)移除阻斷基與螢光後,才能進行下一輪定序。
逐選項解析
A正確配對的中斷子(terminator)不會發出螢光螢光偵測✕ 錯誤
錯誤。正確配對的可逆性中斷子(A、T、C、G)各自帶有特定的螢光標記,在聚合酶作用結合後,經由雷射激發會發出特定波長的螢光,供光學儀器讀取序列訊號,因此一定會發出螢光。
B可逆性中斷子(reversible terminator)為雙去氧核苷酸(dideoxynucleotide)中斷子類型✕ 易錯陷阱
錯誤。可逆性中斷子是在 3'-OH 端加上「可移除阻斷基」的修飾 dNTP;而雙去氧核苷酸(ddNTP)缺乏 3'-OH,屬於「不可逆」中斷子,專用於 Sanger 定序,兩者原理完全不同。
C加入酸性溶液後,才可以繼續下一個鹼基的定序✓ 正確
D此法是運用乳化式增幅(emulsion amplification)原理✕ 易錯陷阱
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