專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學（包括寄生蟲學）114 年第 55 題單選題

關於可逆性中斷子定序法（reversible terminator-based sequencing）的敘述，下列何者最正確？

A正確配對的中斷子（terminator）不會發出螢光

B可逆性中斷子（reversible terminator）為雙去氧核苷酸（dideoxynucleotide）

C加入酸性溶液後，才可以繼續下一個鹼基的定序正確答案

D此法是運用乳化式增幅（emulsion amplification）原理

答案與詳解

正確答案

可逆性中斷子定序法（如 Illumina）使用帶螢光且 3' 端具阻斷基的修飾核苷酸，需加入化學試劑（切位液）移除阻斷基與螢光後，才能進行下一輪定序。

正確。在讀取螢光訊號後，必須加入特定的化學切位試劑（如含 TCEP 的微酸性還原緩衝液）來切除 3' 端的阻斷基團與螢光分子，恢復 3'-OH 端，才能繼續結合下一個鹼基，使定序反應得以延續。

考點：螢光偵測考點：中斷子類型考點：切除阻斷基考點：增幅原理

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