專技高考-醫事檢驗師生物化學與臨床生化學112 年第 20 題單選題
使用 biuret method 定量蛋白質時，下列敘述何者正確？
A通常利用酸性環境進行此反應
B試劑中含 biuret 可促進呈色
C反應後產生黃色複合物可供偵測
D試劑中含 Cu2+ 可與胜肽鍵作用正確答案
D正確答案
Biuret 法在鹼性環境下，Cu²⁺ 與胜肽鍵中的氮原子配位形成紫色複合物，用於蛋白質定量。
為什麼答案是 D
正確。Biuret 法核心為試劑中的 Cu²⁺ 在鹼性下與蛋白質的胜肽鍵（peptide bond）中的氮配位形成紫色錯合物，呈色深淺與胜肽鍵數成正比，可定量蛋白質。
載入中…
完整詳解
Pro · 無限重點 Biuret 法在鹼性環境下，Cu²⁺ 與胜肽鍵中的氮原子配位形成紫色複合物，用於蛋白質定量。
記關鍵字：鹼性、Cu²⁺、胜肽鍵、紫色（540nm）。試劑名雖叫 biuret 但不含 biuret 分子。
逐選項分析
A✕ 陷阱
Biuret 反應必須在「鹼性」環境（含 NaOH/KOH）下進行，使 Cu²⁺ 維持可與胜肽鍵作用的狀態，並非酸性環境，故錯誤。
B✕ 陷阱
「Biuret 試劑」是以反應命名（因 biuret 分子也能呈此反應）但試劑本身的呈色關鍵是 Cu²⁺ 與鹼，不是加入 biuret 分子來促進呈色，屬名詞誤導。
C✕
反應後 Cu²⁺ 與胜肽鍵形成的是「紫色」複合物（約 540 nm 吸光），不是黃色，黃色為 xanthoproteic 反應特徵，故錯誤。
D✓ 正確
正確。Biuret 法核心為試劑中的 Cu²⁺ 在鹼性下與蛋白質的胜肽鍵（peptide bond）中的氮配位形成紫色錯合物，呈色深淺與胜肽鍵數成正比，可定量蛋白質。
常見蛋白質定量法比較
| 方法 | 原理/反應對象 | 環境 | 呈色 |
|---|
| Biuret | Cu²⁺ + 胜肽鍵 | 鹼性 | 紫色 (540nm) |
| Lowry | Biuret + Folin（Tyr/Trp） | 鹼性 | 藍色 (750nm) |
| Bradford | Coomassie 染料結合 | 酸性 | 藍色 (595nm) |
| BCA | Cu⁺ + BCA 螯合 | 鹼性 | 紫色 (562nm) |
試劑名為「Biuret 試劑」易誤以為含 biuret 分子（選項B），實際呈色關鍵是鹼性下 Cu²⁺ 與胜肽鍵作用。另易混淆顏色（紫色非黃色）與環境（鹼性非酸性），三個錯誤選項各設一個陷阱。 
