專技高考-醫事檢驗師生物化學與臨床生化學114 年第 15 題單選題
關於雙脲法（biuret）檢測方法之敘述，下列何者錯誤？
A需要銅離子與鹼性環境
B常用的蛋白質檢測方法
C可與三胜肽（tri-peptide）反應良好
D透過銅離子與游離胺基酸形成複合物（multivalent complex）正確答案
D正確答案
雙脲法是銅離子在鹼性環境下與「胜肽鍵」形成紫色錯合物，需至少三胜肽以上，不是與游離胺基酸反應。
為什麼答案是 D
錯誤！Biuret 是 Cu²⁺ 與「胜肽鍵」(peptide bonds) 形成複合物，不是與游離胺基酸。單一胺基酸或雙胜肽（僅 1 個胜肽鍵）都無法顯色。
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完整詳解
Pro · 無限重點 雙脲法是銅離子在鹼性環境下與「胜肽鍵」形成紫色錯合物，需至少三胜肽以上，不是與游離胺基酸反應。
記住關鍵字『胜肽鍵』：游離胺基酸沒有胜肽鍵，無法顯色→D 錯。
逐選項分析
A✕
雙脲反應需 Cu²⁺ 加上 NaOH 鹼性環境，Cu²⁺ 才能與胜肽鍵的氮原子配位形成紫色錯合物，敘述正確。
B✕
Biuret 法是臨床實驗室測總蛋白最常用的方法之一，操作簡便、線性範圍廣，敘述正確。
C✕
雙脲法至少需要含 2 個以上胜肽鍵的化合物才能顯色，三胜肽（含 2 個胜肽鍵）以上皆可反應良好，敘述正確。
D✓ 正確
錯誤！Biuret 是 Cu²⁺ 與「胜肽鍵」(peptide bonds) 形成複合物，不是與游離胺基酸。單一胺基酸或雙胜肽（僅 1 個胜肽鍵）都無法顯色。
常見蛋白質定量法比較
| 方法 | 原理 | 靈敏度 | 最小反應單位 |
|---|
| Biuret | Cu²⁺ + 胜肽鍵（鹼性）→紫色 | 低(mg) | ≥ 三胜肽 |
| Lowry | Biuret + Folin 試劑 | 中(μg) | 胜肽鍵 + Tyr/Trp |
| BCA | Cu⁺ + BCA → 紫色 | 高(μg) | 胜肽鍵 |
| Bradford | Coomassie 染料結合 | 高(μg) | 鹼性胺基酸 |
D 選項把『胜肽鍵』偷換成『游離胺基酸』。這是 Biuret 法最經典的考點陷阱——銅離子是與胜肽鍵的 N 原子配位，而不是與胺基酸側鏈或游離胺基酸反應，所以單一胺基酸測不到訊號。 
