專技高考-醫事檢驗師生物化學與臨床生化學114 年第 78 題單選題
下列何種技術並未應用於次世代定序儀（NGS）來偵測基因突變？
A焦磷酸反應定序（pyrosequencing）
B離子半導體定序（ion semiconductor sequencing）
C奈米孔定序（nanopore sequencing）
D增幅阻礙突變系統（amplification refractory mutation system, ARMS）正確答案
D正確答案
NGS 平台常見技術有焦磷酸、離子半導體、奈米孔；ARMS 是 PCR-based 點突變偵測法，非 NGS。
為什麼答案是 D
ARMS 是利用 3' 端特異性引子搭配 PCR 來判別點突變（如 EGFR 突變檢測），屬於 allele-specific PCR，並非 NGS 技術，為本題答案。
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完整詳解
Pro · 無限重點 NGS 平台常見技術有焦磷酸、離子半導體、奈米孔；ARMS 是 PCR-based 點突變偵測法，非 NGS。
看到 ARMS（增幅阻礙突變系統）→ 這是 allele-specific PCR 的變形，屬於傳統 PCR 技術，不是定序平台。
逐選項分析
A✕
焦磷酸定序是 Roche 454 平台的核心技術，利用 dNTP 併入時釋放 pyrophosphate，經酵素連鎖反應產生螢光訊號，屬於早期 NGS 的代表。
B✕
離子半導體定序為 Ion Torrent 平台技術，偵測 dNTP 併入時釋放的 H⁺ 造成 pH 變化，以半導體晶片讀取，屬於 NGS。
C✕
奈米孔定序為 Oxford Nanopore 第三代定序技術（也常歸在廣義 NGS），DNA 通過奈米孔時造成電流變化以判讀鹼基，可讀長序列。
D✓ 正確
ARMS 是利用 3' 端特異性引子搭配 PCR 來判別點突變（如 EGFR 突變檢測），屬於 allele-specific PCR，並非 NGS 技術，為本題答案。
NGS 主要定序技術對照
| 技術 | 平台 | 偵測原理 | 世代 |
|---|
| 焦磷酸定序 | Roche 454 | PPi 釋放→螢光 | 第二代 |
| 離子半導體 | Ion Torrent | H⁺ 釋放→pH變化 | 第二代 |
| 合成定序 SBS | Illumina | 可逆終止+螢光 | 第二代 |
| 奈米孔定序 | Oxford Nanopore | 電流變化 | 第三代 |
| ARMS | 傳統 PCR | 特異性引子擴增 | 非定序 |
ARMS 常與 NGS 一同出現在「基因突變檢測」章節，容易誤以為也是 NGS。但 ARMS 本質是 allele-specific PCR，只能檢測已知突變，未進行定序反應，與 NGS 平台技術無關。 
