專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學（包括寄生蟲學）105 年第 48 題單選題
下列關於聚合酶連鎖反應（PCR）的敘述，何者錯誤？
AMg2+濃度太高易產生非特異性的產物
BDNA中有EDTA成分要外加Mg2+
C反應中加入DMSO可以減少DNA模板的二級結構
D一般反應的 pH值介於 pH 7 ～ pH 7.5正確答案
D正確答案
PCR 反應緩衝液 pH 通常介於 8.0-9.5（多為 pH 8.3-8.8），而非 pH 7-7.5。
為什麼答案是 D
錯誤敘述（即正解）。PCR 緩衝液主成分為 Tris-HCl，最適 pH 約 8.3-8.8（室溫），反應時 pH 約 8.0-9.5，呈弱鹼性。pH 7-7.5 過低會降低 Taq polymerase 活性。
載入中…
完整詳解
Pro · 無限重點 PCR 反應緩衝液 pH 通常介於 8.0-9.5（多為 pH 8.3-8.8），而非 pH 7-7.5。
記住 PCR Buffer 是「鹼性偏中」(Tris-HCl pH 8.3)，看到 pH 7 直接刷掉。
逐選項分析
A✕
正確敘述。Mg²⁺ 是 DNA polymerase 的輔因子，但濃度過高會降低引子專一性配對，導致非特異性產物（mispriming、smear）增加，常見最佳濃度約 1.5-2.5 mM。
B✕
正確敘述。EDTA 是金屬離子螯合劑，會結合 Mg²⁺ 使其無法供 DNA polymerase 使用，故樣本中若含 EDTA（如抗凝血劑），需額外補充 Mg²⁺ 以維持酵素活性。
C✕
正確敘述。DMSO（二甲基亞碸）為常用 PCR 添加劑，能破壞 DNA 二級結構（如 GC-rich 區域的髮夾結構），有助於模板變性與引子結合，提高擴增效率。
D✓ 正確
錯誤敘述（即正解）。PCR 緩衝液主成分為 Tris-HCl，最適 pH 約 8.3-8.8（室溫），反應時 pH 約 8.0-9.5，呈弱鹼性。pH 7-7.5 過低會降低 Taq polymerase 活性。
PCR 反應條件關鍵參數
| 參數 | 最適範圍 | 過高影響 | 過低影響 |
|---|
| Mg²⁺ 濃度 | 1.5-2.5 mM | 非專一性產物增加 | 產量降低、無產物 |
| pH 值 | 8.3-8.8 (Tris-HCl) | 酵素變性 | 酵素活性下降 |
| 引子濃度 | 0.1-0.5 μM | Primer-dimer | 擴增不足 |
| dNTP | 200 μM each | 螯合 Mg²⁺ | 產量低 |
| DMSO | 5-10% | 抑制酵素活性 | 二級結構未解開 |
考生易將「生理 pH 7.4」直覺套用到 PCR，但 PCR 用的是 Tris-HCl 緩衝液，pH 約 8.3-8.8 偏鹼性。記住 Taq polymerase 來自嗜熱菌，最適 pH 偏鹼，這是分子檢驗常考的細節陷阱。
醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學（包括寄生蟲學） 相關題目
