專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學（包括寄生蟲學）114 年第 48 題單選題
關於巢式聚合酶連鎖反應（nested PCR）的敘述，下列何者最不適當？
A是將第一次PCR反應的產物作為第二次PCR反應的模板
B需設計兩組引子（primer）
C通常在模板DNA含量較高時使用正確答案
D所使用的第二組引子（primer）會結合在第一次PCR產物的內部
C正確答案
巢式PCR是兩輪PCR放大訊號，專門用在模板量少或複雜樣本時提升靈敏度與專一性。
為什麼答案是 C
最不適當。nested PCR的設計目的是提升靈敏度與專一性，用於模板DNA含量「低」或樣本中有干擾物時，含量高時直接做一般PCR即可。
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完整詳解
Pro · 無限重點 巢式PCR是兩輪PCR放大訊號，專門用在模板量少或複雜樣本時提升靈敏度與專一性。
看到「模板含量高」就選——模板多根本不需要兩輪放大，直接一次PCR即可。
逐選項分析
A✕
正確敘述。第一輪PCR產物作為第二輪的模板，是nested PCR的核心操作流程。
B✕
正確敘述。需設計兩組引子：外側引子（outer primer）用於第一輪、內側引子（inner primer）用於第二輪。
C✓ 正確
最不適當。nested PCR的設計目的是提升靈敏度與專一性，用於模板DNA含量「低」或樣本中有干擾物時，含量高時直接做一般PCR即可。
D✕
正確敘述。第二組內側引子結合位置位於第一輪產物的內部序列，才能過濾非專一性產物並放大目標片段。
Nested PCR 核心特性
| 項目 | 內容 | 目的 | 備註 |
|---|
| 引子組數 | 2 組（外側+內側） | 兩階段專一性篩選 | 內側位於外側產物內部 |
| 反應輪數 | 2 輪PCR | 放大稀少訊號 | 第一輪產物當第二輪模板 |
| 適用時機 | 模板DNA量極少 | 提升靈敏度 | 如寄生蟲、微量檢體 |
| 優點 | 靈敏度高、專一性高 | 降低非專一性產物 | 可減少偽陽性判讀困擾 |
| 缺點 | 汙染風險高、耗時 | 兩次開管易交叉污染 | 需嚴格操作 |
C 選項把適用時機顛倒了。Nested PCR 存在的意義就是「模板少也能放大到可偵測」，若模板含量已經高，根本不需要多做一輪，反而增加污染風險與成本。考生若沒抓住「靈敏度提升」的核心目的，容易誤判。
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