專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學（包括寄生蟲學）114 年第 53 題單選題
序列特異聚合酶連鎖反應（polymerase chain reaction-sequence-specific primers, PCR-SSP）是基於sequence-specific primers進行多樣性基因分型,下列敘述何者最不適當?
A臨床上可用在human leukocyte antigen（HLA）typing
B使用的Taq DNA polymerase，需要有3'端至5'端exonuclease活性正確答案
C操作時，需有增幅內生性對照組（internal control）
D反應完後，需要進行電泳分析
B正確答案
PCR-SSP 依賴引子 3' 端錯配時無法延伸的特性來分型，因此使用的 Taq 聚合酶絕對不能有 3'→5' 校對（exonuclease）活性。
為什麼答案是 B
本題為反向題。PCR-SSP 需要 Taq 聚合酶「沒有」3'→5' 校對活性，否則會切除引子 3' 端的錯配鹼基並繼續延伸，導致失去特異性（偽陽性）。
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完整詳解
Pro · 無限重點 PCR-SSP 依賴引子 3' 端錯配時無法延伸的特性來分型，因此使用的 Taq 聚合酶絕對不能有 3'→5' 校對（exonuclease）活性。
PCR-SSP 靠引子 3' 端 mismatch 來區分基因型，若酵素有 3'→5' 校對活性會把錯配切掉繼續合成，特異性就毀了！秒選B。
逐選項分析
A✕
PCR-SSP 廣泛應用於臨床 HLA (人類白血球抗原) 基因分型，快速且準確。
B✓ 正確
本題為反向題。PCR-SSP 需要 Taq 聚合酶「沒有」3'→5' 校對活性，否則會切除引子 3' 端的錯配鹼基並繼續延伸，導致失去特異性（偽陽性）。
C✕
為了避免偽陰性（因 PCR 失敗導致無產物而被誤判為該基因型陰性），必須加入內生性對照組（internal control）確認反應本身是成功的。
D✕
PCR-SSP 主要是透過膠體電泳（Agarose gel electrophoresis）觀察是否有特定大小的擴增產物來判斷基因型。
PCR-SSP 核心概念總整理
| 項目 | 說明 |
|---|
| 核心原理 | 利用引子 3' 端與模板是否完全互補來決定能否擴增 |
| 聚合酶要求 | 必須「無」3'→5' exonuclease 活性（無校對功能） |
| 內部對照 | 必須有 internal control，避免將 PCR 失敗誤判為陰性 |
| 結果判讀 | 膠體電泳分析產物有無（有產物代表具該等位基因） |
一般高保真（High-fidelity）PCR 需要 3'→5' 校對活性來減少突變，但 PCR-SSP 正是利用「錯配就不延伸」的特性來區分基因型，若有校對活性反而會破壞此檢測機制，考生極易將『好酵素要有校對功能』的刻板印象套用在此而答錯。
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