專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學（包括寄生蟲學）115 年第 48 題單選題
關於 PCR、RT-PCR及 nested PCR的敘述，下列何者最不適當？
ART-PCR 和PCR 的主要差異是所使用的模板分別是 RNA 與DNA
B巢式聚合酶連鎖反應（nested PCR）和 RT-PCR 都是經過兩階段的PCR 反應正確答案
C在 RT-PCR反應中可以設計加入螢光物質或螢光探針（probe），利用螢光訊號的偵測來判斷結果
D這三種技術都可以使用瓊脂凝膠電泳分析結果
B正確答案
RT-PCR 本質是「反轉錄 + PCR」，但不等於 nested PCR 的兩階段 PCR 反應。
為什麼答案是 B
最不適當。Nested PCR 是「兩階段 PCR」（用外引子 + 內引子兩輪擴增）；但 RT-PCR 的兩階段是「反轉錄 (RT) + PCR」，反轉錄不是 PCR 反應，兩者機制不同。
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完整詳解
Pro · 無限重點 RT-PCR 本質是「反轉錄 + PCR」，但不等於 nested PCR 的兩階段 PCR 反應。
看到「都是兩階段 PCR」要警覺：RT-PCR 的第一階段是反轉錄 (RT)，不是 PCR！
逐選項分析
A✕
正確。PCR 以 DNA 為模板；RT-PCR 先將 RNA 反轉錄成 cDNA 再進行 PCR，故模板分別為 DNA 與 RNA，這是兩者最核心的差異。
B✓ 正確
最不適當。Nested PCR 是「兩階段 PCR」（用外引子 + 內引子兩輪擴增）；但 RT-PCR 的兩階段是「反轉錄 (RT) + PCR」，反轉錄不是 PCR 反應，兩者機制不同。
C✕
正確。即時 RT-PCR (qRT-PCR) 可加入 SYBR Green 染劑或 TaqMan probe 等螢光探針，透過螢光訊號定量或判讀結果，為臨床分子檢驗常見方式。
D✕
正確。PCR、RT-PCR、nested PCR 的最終產物皆為 DNA 片段，都可用瓊脂糖凝膠電泳 (agarose gel electrophoresis) 分析產物大小與純度。
三種 PCR 技術比較
| 技術 | 模板 | 反應階段 | 主要用途 |
|---|
| PCR | DNA | 單階段 PCR | DNA 擴增 |
| RT-PCR | RNA | 反轉錄 (RT) + PCR | RNA 病毒、基因表現偵測 |
| Nested PCR | DNA | 兩輪 PCR（外引子→內引子） | 提高專一性與靈敏度 |
題目用「兩階段」這個模糊詞把 RT-PCR 和 nested PCR 類比，但 RT-PCR 的第一階段是反轉錄（酵素為反轉錄酶），並非 PCR；nested PCR 的兩階段才都是真正的 PCR 反應。看到「都是兩階段 PCR」務必拆解定義。
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