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專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學(包括寄生蟲學)115 年第 56 題單選題考點:文庫建立考點:讀長比較

關於次世代定序及傳統桑格定序的方法之敘述,下列何者最正確?

A兩者皆需建立文庫(library)
B就單一片段而言,桑格定序讀長較次世代定序長正確答案
C就每個鹼基而言,次世代定序費用較桑格定序高
D就資料分析而言,桑格定序較次世代定序複雜
答案與詳解
B
正確答案
桑格定序單一片段讀長可達 800-1000 bp,次世代定序單片段讀長較短但可大規模平行化。

逐選項解析

A兩者皆需建立文庫(library)文庫建立✕ 易錯陷阱
只有 NGS 需要建立文庫(library preparation),桑格定序直接以 PCR 產物或質體為模板進行定序反應,不需建立文庫。
B就單一片段而言,桑格定序讀長較次世代定序長讀長比較✓ 正確
桑格定序單一片段讀長約 800-1000 bp,而 NGS(如 Illumina)單片段讀長僅 150-300 bp。就「單一片段讀長」而言桑格確實較長,這是桑格至今仍用於驗證的原因。
C就每個鹼基而言,次世代定序費用較桑格定序高✕ 易錯陷阱
D就資料分析而言,桑格定序較次世代定序複雜✕ 錯誤

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