專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學（包括寄生蟲學）115 年第 56 題單選題
關於次世代定序及傳統桑格定序的方法之敘述，下列何者最正確？
A兩者皆需建立文庫（library）
B就單一片段而言，桑格定序讀長較次世代定序長正確答案
C就每個鹼基而言，次世代定序費用較桑格定序高
D就資料分析而言，桑格定序較次世代定序複雜
B正確答案
桑格定序單一片段讀長可達 800-1000 bp，次世代定序單片段讀長較短但可大規模平行化。
為什麼答案是 B
桑格定序單一片段讀長約 800-1000 bp，而 NGS（如 Illumina）單片段讀長僅 150-300 bp。就「單一片段讀長」而言桑格確實較長，這是桑格至今仍用於驗證的原因。
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完整詳解
Pro · 無限重點 桑格定序單一片段讀長可達 800-1000 bp，次世代定序單片段讀長較短但可大規模平行化。
記關鍵：Sanger＝長讀短通量；NGS＝短讀高通量、低單價、分析複雜。
逐選項分析
A✕ 陷阱
只有 NGS 需要建立文庫（library preparation），桑格定序直接以 PCR 產物或質體為模板進行定序反應，不需建立文庫。
B✓ 正確
桑格定序單一片段讀長約 800-1000 bp，而 NGS（如 Illumina）單片段讀長僅 150-300 bp。就「單一片段讀長」而言桑格確實較長，這是桑格至今仍用於驗證的原因。
C✕ 陷阱
NGS 因大規模平行定序，單一鹼基成本遠低於桑格定序。桑格單次反應只讀一段，每鹼基費用較貴；NGS 一次產出 Gb 級資料，每鹼基費用極低。
D✕
NGS 資料量龐大（Gb 級），需專業生物資訊工具進行比對、組裝與變異分析，資料分析遠比桑格複雜。桑格僅需讀波峰圖即可判讀。
Sanger vs NGS 核心比較
| 項目 | Sanger 桑格定序 | NGS 次世代定序 |
|---|
| 文庫建立 | 不需要 | 必需 |
| 單片段讀長 | 800-1000 bp（長） | 150-300 bp（短） |
| 通量 | 低（單次一段） | 極高（百萬級平行） |
| 每鹼基費用 | 高 | 低 |
| 資料分析 | 簡單（讀波峰） | 複雜（需生資工具） |
| 臨床用途 | 變異驗證、短片段 | 全基因體、Panel、RNA-seq |
本題 A、C、D 全屬「特性對調」陷阱：文庫是 NGS 才需要、每鹼基 NGS 較便宜、資料分析 NGS 較複雜。考生若只記「NGS 比較先進」就容易誤選，必須清楚每項指標的方向。
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