專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學（包括寄生蟲學）112 年第 55 題單選題
下列何者不是nested PCR方法的優點？
A敏感性（sensitivity）高
B特異性（specificity）高
CPCR反應模板（template）所需量較低
DPCR反應Taq DNA polymerase 所需量較低正確答案
D正確答案
Nested PCR用兩對引子做兩輪擴增，優點是高敏感性、高特異性、模板需求低，但因做兩輪反應，反而需要更多Taq酶。
為什麼答案是 D
這是要選的「非優點」。Nested PCR需做兩輪獨立的PCR反應，每輪都要加Taq DNA polymerase，總酶用量反而比單輪PCR多，且步驟繁瑣、汙染風險增加。故D描述錯誤。
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完整詳解
Pro · 無限重點 Nested PCR用兩對引子做兩輪擴增，優點是高敏感性、高特異性、模板需求低，但因做兩輪反應，反而需要更多Taq酶。
做兩輪PCR怎麼可能省酶？兩次反應酶用量加倍，D是缺點不是優點，直接選D。
逐選項分析
A✕
第一輪先擴增外側片段，第二輪再用內側引子擴增，等於把目標DNA放大兩次，訊號倍增，因此敏感性極高，可偵測極微量病原核酸。這是nested PCR最大優點。
B✕
第二輪使用內側引子，必須同時辨識第一輪產物上的兩個正確序列，等於雙重確認，大幅減少非專一性產物（如primer dimer或錯配），故特異性高。
C✕
因為敏感性高，第一輪僅需少量模板即可成功擴增出足夠產物供第二輪使用，因此對起始模板量要求較低，適合臨床檢體量稀少的情況。
D✓ 正確
這是要選的「非優點」。Nested PCR需做兩輪獨立的PCR反應，每輪都要加Taq DNA polymerase，總酶用量反而比單輪PCR多，且步驟繁瑣、汙染風險增加。故D描述錯誤。
Nested PCR 優缺點整理
| 項目 | 說明 | 優/缺 |
|---|
| 敏感性 | 兩輪擴增，訊號倍增 | 優點 |
| 特異性 | 內側引子雙重確認序列 | 優點 |
| 模板需求 | 少量起始DNA即可 | 優點 |
| 酶/試劑用量 | 兩輪反應需更多Taq | 缺點 |
| 汙染風險 | 開蓋轉移產物易汙染 | 缺點 |
題目把nested PCR的「缺點」偽裝成優點。考生若只記得它敏感、特異就容易誤判，忽略它要做兩輪反應、試劑（含Taq酶）用量更多、汙染風險更高這些代價。記住：放大兩次=成本兩倍。
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