專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學（包括寄生蟲學）112 年第 70 題單選題
關於thermostable polymerase的特性與應用，下列敘述何者最不適當？
ATth polymerase適用於one step real-time RT-PCR
BTth polymerase具有反轉錄酶（reverse transcriptase）的活性
CTag polymerase的stoffel fragment具有3'端至5'端exonuclease活性正確答案
DTag polymerase的stoffel fragment適合擴增高GC比的片段正確答案
C、D正確答案
本題問「最不適當」，C 錯誤：Taq polymerase 的 Stoffel fragment 缺乏 5'→3' 外切酶活性，且本身也無 3'→5' 校正活性。
為什麼答案是 C、D
Stoffel fragment 是 Taq polymerase 去除 N 端後的截短片段，已喪失原本就有的 5'→3' exonuclease 活性，且 Taq 系列本身就缺乏 3'→5' 校正（proofreading）外切酶活性，故此敘述錯誤，為本題答案。
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完整詳解
Pro · 無限重點 本題問「最不適當」，C 錯誤：Taq polymerase 的 Stoffel fragment 缺乏 5'→3' 外切酶活性，且本身也無 3'→5' 校正活性。
記口訣：Taq 系列都缺 3'→5' 校正酶活性！只要說 Taq 有 exonuclease 校正活性就是錯。
逐選項分析
A✕
Tth polymerase 在錳離子（Mn²⁺）存在下兼具反轉錄與聚合活性，可一管完成反轉錄與擴增，故適用於 one-step real-time RT-PCR，敘述正確。
B✕
Tth polymerase 來自 Thermus thermophilus，在 Mn²⁺ 條件下具有反轉錄酶（RT）活性，能將 RNA 反轉錄成 cDNA，敘述正確。
C✓ 正確
Stoffel fragment 是 Taq polymerase 去除 N 端後的截短片段，已喪失原本就有的 5'→3' exonuclease 活性，且 Taq 系列本身就缺乏 3'→5' 校正（proofreading）外切酶活性，故此敘述錯誤，為本題答案。
D✕
Stoffel fragment 熱穩定性較高、對鎂離子濃度耐受範圍廣，且無 5'→3' 外切酶活性，適合擴增高 GC、需較嚴苛條件的片段，敘述正確。
常見耐熱聚合酶活性比較
| 酵素 | 5'→3'聚合 | 3'→5'校正 | 其他特性 |
|---|
| Taq | 有 | 無 | 有5'→3'外切酶 |
| Stoffel fragment | 有 | 無 | 無5'→3'外切酶，耐高GC |
| Tth | 有 | 無 | Mn²⁺下具RT活性 |
| Pfu | 有 | 有 | 高保真，可校正 |
選項 C 把「3'→5' exonuclease（校正活性）」硬塞給 Taq 的 Stoffel fragment。事實上 Taq 系列皆無校正活性，Stoffel 更連原本 5'→3' 外切酶都被截除，雙重錯誤是出題者設下的陷阱。
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