專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學（包括寄生蟲學）112 年第 49 題單選題
關於目前臨床上較常使用的兩個次世代定序平台的敘述，下列何者最不適當？
AIllumina定序平台主要以橋式PCR（bridge PCR）的方式來進行增幅
BIllumina的可逆性中斷子定序（reversible terminator-based sequencing）是利用帶有不同顏色螢光標記的可逆性中斷子（reversible terminator）來進行反應
C賽默飛世爾（ThermoFisher）公司的Ion Torrent平台是用乳化PCR（emulsion PCR）來擴增核酸片段
DIon Torrent所使用的半導體定序技術是偵測DNA聚合反應時產生之焦磷酸根離子造成pH值的變化正確答案
D正確答案
Ion Torrent半導體定序偵測的是DNA合成時釋放的氫離子(H+)造成pH變化，不是焦磷酸根離子。
為什麼答案是 D
錯誤（即本題答案）。Ion Torrent半導體定序偵測的是DNA聚合反應時釋放的「氫離子(H+)」造成的pH變化，而非焦磷酸根離子。焦磷酸根訊號屬於焦磷酸定序(pyrosequencing)，二者混淆是常見陷阱。
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完整詳解
Pro · 無限重點 Ion Torrent半導體定序偵測的是DNA合成時釋放的氫離子(H+)造成pH變化，不是焦磷酸根離子。
焦磷酸根(PPi)是焦磷酸定序(pyrosequencing)的訊號；Ion Torrent靠的是氫離子(H+)→pH值改變。
逐選項分析
A✕
正確。Illumina平台利用橋式PCR（bridge PCR）在flow cell表面進行原位增幅，形成密集的cluster以提升訊號強度，是其標誌性技術。
B✕
正確。Illumina採用合成定序(SBS)，使用帶不同螢光標記的可逆性中斷子，每次只加入一個核苷酸，讀取螢光後切除阻斷基團再進行下一輪反應。
C✕
正確。Ion Torrent（ThermoFisher）採用乳化PCR(emulsion PCR)在微珠上擴增核酸片段，再置入半導體晶片的微孔中進行定序，敘述無誤。
D✓ 正確
錯誤（即本題答案）。Ion Torrent半導體定序偵測的是DNA聚合反應時釋放的「氫離子(H+)」造成的pH變化，而非焦磷酸根離子。焦磷酸根訊號屬於焦磷酸定序(pyrosequencing)，二者混淆是常見陷阱。
兩大NGS平台技術對照
| 平台 | 擴增方式 | 定序原理 | 偵測訊號 |
|---|
| Illumina | 橋式PCR(bridge PCR) | 合成定序SBS+可逆中斷子 | 螢光 |
| Ion Torrent | 乳化PCR(emulsion PCR) | 半導體定序 | H+離子→pH變化 |
| Pyrosequencing | 乳化PCR | 焦磷酸定序 | PPi→光訊號 |
本題將Ion Torrent的偵測對象從正確的「氫離子(H+)造成pH變化」偷換為「焦磷酸根離子」。焦磷酸根(PPi)是焦磷酸定序(pyrosequencing)的訊號分子，兩種技術原理不同，極易混淆。記住：Ion Torrent=H+=pH變化。
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