焦磷酸定序（Pyrosequencing）需四種酵素來完成反應，其順序為：①Luciferase ②DNA polymerase ③Apyrase ④Sulfurylase

②DNA polymerase 催化 dNTP 加入並釋放 PPi → ④Sulfurylase 將 PPi + APS 轉成 ATP → ①Luciferase 利用 ATP 使 luciferin 發光被偵測 → ③Apyrase 分解未反應的 dNTP 與 ATP，準備下一輪反應。