專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學(包括寄生蟲學)105 年第 52 題單選題
焦磷酸定序(Pyrosequencing)不能應用於下列何者?
AHLA分型(HLA typing)
B細菌分型(Bacterial typing)
C拷貝數變異(Copy number variant)的分析
DRNA次級結構的分析正確答案
D正確答案
焦磷酸定序屬短片段DNA定序技術,無法分析RNA的立體次級結構。
為什麼答案是 D
焦磷酸定序只讀取 DNA 的「線性序列」,而 RNA 次級結構(如髮夾、莖環)屬立體折疊,需用 RNase 探測、SHAPE、X-ray、cryo-EM 等方法分析,與定序原理無關。
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完整詳解
Pro · 無限重點 焦磷酸定序屬短片段DNA定序技術,無法分析RNA的立體次級結構。
Pyrosequencing 本質是「短讀長 DNA 定序」→ 凡需要「序列資訊」的應用都行,但「立體結構」分析不行。
逐選項分析
A✕
HLA 分型需偵測高度多型性的 SNP 序列,焦磷酸定序短讀長定序正適合此類片段分型用途,臨床移植配對常用。
B✕
細菌分型可透過 16S rRNA 基因或特定變異區短片段定序進行鑑定,焦磷酸定序短讀長且高通量,相當適用於微生物鑑定。
C✕ 陷阱
焦磷酸定序可透過釋放焦磷酸的訊號強度(peak height)做定量,進而推估基因拷貝數變異(CNV),屬其延伸應用之一。
D✓ 正確
焦磷酸定序只讀取 DNA 的「線性序列」,而 RNA 次級結構(如髮夾、莖環)屬立體折疊,需用 RNase 探測、SHAPE、X-ray、cryo-EM 等方法分析,與定序原理無關。
焦磷酸定序(Pyrosequencing)核心特性
| 項目 | 內容 | 臨床應用 | 限制 |
|---|
| 原理 | DNA 聚合釋放 PPi → ATP → 螢光 | 短片段定序 | 讀長僅 ~300-500 bp |
| 適用 | SNP、突變、甲基化、菌種鑑定 | HLA、細菌分型、CNV、KRAS | 不適用長片段、結構分析 |
| 對象 | DNA(含 cDNA) | 基因型/序列分析 | 無法分析 RNA 折疊結構 |
考生易誤以為「定序技術 = 萬能分析」,但定序只給「序列(一維資訊)」,而 RNA 次級結構是「立體折疊(二/三維)」,需另以化學探測或結構生物學方法分析,兩者層次不同。
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