專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學（包括寄生蟲學）105 年第 53 題單選題
以熔解曲線分析法（Melting curve analysis）偵測single nucleotide polymorphism（SNP），下列敘述何者正確？
A變性梯度膠體電泳法或即時聚合酶連鎖反應等技術常運用於熔解曲線分析法
B當探針（Probe）與欲偵測之基因完整配對時其熔解溫度會比錯誤配對（Mismatch）熔解溫度高正確答案
C即時聚合酶連鎖反應之Ct（Threshold cycle）比熔解曲線更適合判斷是否有SNP之存在
D非探針型螢光染劑SYBR-green I進行即時聚合酶連鎖反應之熔解曲線分析無法應用在SNP偵測
B正確答案
熔解曲線分析中，探針與目標完整配對時 Tm 較高，錯配（mismatch）會使 Tm 下降，可用於 SNP 判別。
為什麼答案是 B
完整配對（perfect match）的雙股 DNA 氫鍵完整、最穩定，需較高溫度才能解離，故 Tm 較高；單鹼基錯配（mismatch）會破壞局部氫鍵，雙股較不穩，Tm 下降，這正是用熔解曲線判別 SNP 的核心原理。
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完整詳解
Pro · 無限重點 熔解曲線分析中，探針與目標完整配對時 Tm 較高，錯配（mismatch）會使 Tm 下降，可用於 SNP 判別。
記一句口訣：『完整配對穩、Tm 高；錯配不穩、Tm 低』。SNP 造成單鹼基錯配，雙股穩定度下降，熔解溫度降低。
逐選項分析
A✕ 陷阱
DGGE（變性梯度膠體電泳）是利用變性劑梯度分離不同序列 DNA，原理與熔解曲線分析無關；熔解曲線分析主要搭配 real-time PCR + 螢光染劑/探針進行，不會搭配 DGGE。
B✓ 正確
完整配對（perfect match）的雙股 DNA 氫鍵完整、最穩定，需較高溫度才能解離，故 Tm 較高；單鹼基錯配（mismatch）會破壞局部氫鍵，雙股較不穩，Tm 下降，這正是用熔解曲線判別 SNP 的核心原理。
C✕ 陷阱
Ct 值反映的是模板起始量（量的多寡），與序列差異無關；要判斷 SNP（質的差異）必須看熔解曲線的 Tm 位移，所以是熔解曲線比 Ct 更適合判別 SNP，本選項敘述顛倒。
D✕ 陷阱
SYBR Green I 是非專一性嵌入雙股 DNA 的螢光染劑，仍可在 PCR 後執行熔解曲線分析；不同 SNP 型態的產物 Tm 會略有差異，HRM（高解析度熔解曲線）即廣泛應用於 SNP 分型。
熔解曲線分析判別 SNP 的關鍵原理
| 狀態 | 氫鍵/穩定度 | Tm 高低 | 曲線表現 |
|---|
| 探針與目標完整配對 (Match) | 氫鍵完整、最穩定 | Tm 較高 | 解離峰偏右 |
| 單鹼基錯配 (Mismatch / SNP) | 局部氫鍵破壞、較不穩 | Tm 較低 | 解離峰左移 |
| GC 含量高的片段 | 氫鍵較多 | Tm 較高 | 峰偏右 |
| AT 含量高的片段 | 氫鍵較少 | Tm 較低 | 峰偏左 |
C 選項把『量（Ct）』與『質（Tm）』功能對調，是最常見陷阱；A 選項把不相干的 DGGE 技術硬塞進熔解曲線分析；D 則錯誤限制 SYBR Green 不能用於 SNP，事實上 HRM 就是用 SYBR Green 類嵌入染劑做 SNP 分型。
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