專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學（包括寄生蟲學）113 年第 59 題單選題
NPM1基因的變異常出現在血液腫瘤中，其中最常見的是在第十二外顯子（exon 12）有4 bp的插入（insertion）突變。假設野生型的序列為GCTATTCAAGATCTCTG▼GCAGTGGAGGAAGTCTCTT，▼表示突變插入處。若以傳統的聚合酶連鎖反應配合桑格定序（Sanger sequencing），則最有可能有插入突變的定序圖為何？
C正確答案
NPM1基因雜合插入突變在Sanger定序圖的經典表現：插入點前清晰，插入點處雙峰，點後圖譜混亂。
為什麼答案是 C
正確。雜合4 bp插入會導致移碼，插入點後野生型與突變型序列錯位，圖譜呈現雙峰重疊且後續混亂(noisy)，為典型雜合插入特徵。
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完整詳解
Pro · 無限重點 NPM1基因雜合插入突變在Sanger定序圖的經典表現：插入點前清晰，插入點處雙峰，點後圖譜混亂。
Sanger定序看插入/缺失：雜合插入點後「圖譜大亂(雙峰重疊)」；點突變僅「單一位置雙峰」後恢復正常。
逐選項分析
A✕
此選項通常呈現「單一位置雙峰，後續序列恢復清晰」，這是「點突變(SNP)」的特徵，而非4 bp插入造成的移碼效應。
B✕ 陷阱
此選項呈現「圖譜整體向後平移但依然清晰」，這是「純合子插入」的特徵。但NPM1突變臨床多為雜合，考選部最愛用純合圖譜來誘導考生。
C✓ 正確
正確。雜合4 bp插入會導致移碼，插入點後野生型與突變型序列錯位，圖譜呈現雙峰重疊且後續混亂(noisy)，為典型雜合插入特徵。
D✕
此選項呈現「全段序列清晰無雙峰」，代表無突變的野生型(WT)序列，完全沒有插入突變的跡象。
Sanger定序圖譜突變類型判讀
| 突變類型 | 雜合圖譜特徵 | 純合圖譜特徵 | 臨床常見例子 |
|---|
| 點突變(SNP) | 單一位置雙峰，前後清晰 | 單一位置單峰改變 | 多數SNP、HLA分型 |
| 插入/缺失(Indel) | 突變點後圖譜混亂(雙峰重疊) | 圖譜整體平移，依然清晰 | NPM1, FLT3-ITD |
| 大片段缺失 | 突變點後無訊號或混亂 | 圖譜整體前移，依然清晰 | 特定基因缺損 |
考生易將「雜合插入」與「純合插入」的圖譜特徵混淆。NPM1突變在臨床上幾乎皆為雜合，必須記住「雜合Indel會導致移碼，使插入點後的圖譜變成一團混亂的雙峰重疊」，而非單純的序列平移。
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