專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學（包括寄生蟲學）113 年第 65 題單選題
關於 nucleic acid sequence-based amplification（NASBA）的敘述，下列何者最不適當？
A此技術已被廣泛應用於RNA病毒與細菌的偵測
B可以加入寡核苷酸探針的信號分子（molecular beacon），再藉由反應後所產生之螢光訊號的強度定量RNA，此稱為 real-time NASBA
C若檢體中有少量雙股DNA存在，會有偽陽性的結果，所以反應時需要加入DNase去除DNA正確答案
Dreal-time NASBA的擴增與檢測反應，全在同一密閉管內進行，可以降低核酸污染發生的可能性
C正確答案
NASBA是等溫RNA擴增技術，專一擴增RNA不需DNase去DNA，故C敘述最不適當。
為什麼答案是 C
NASBA是等溫擴增且專一以RNA為模板（透過反轉錄酶、RNase H、T7 RNA聚合酶運作），對雙股DNA擴增效率極低，並非靠加DNase來避免偽陽性，故此敘述最不適當，為正解。
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完整詳解
Pro · 無限重點 NASBA是等溫RNA擴增技術，專一擴增RNA不需DNase去DNA，故C敘述最不適當。
NASBA設計上以RNA為模板、等溫進行，本身對DNA專一性高，看到「需加DNase」就是錯的。
逐選項分析
A✕
NASBA因專一擴增RNA，確實廣泛用於RNA病毒（如HIV、流感）與細菌（多偵測rRNA或mRNA）的檢測，敘述正確。
B✕
加入molecular beacon探針，反應中產生螢光並即時偵測強度以定量RNA，即為real-time NASBA，敘述正確。
C✓ 正確
NASBA是等溫擴增且專一以RNA為模板（透過反轉錄酶、RNase H、T7 RNA聚合酶運作），對雙股DNA擴增效率極低，並非靠加DNase來避免偽陽性，故此敘述最不適當，為正解。
D✕
real-time NASBA的擴增與螢光偵測在同一密閉管內完成，無須開蓋操作，可降低交叉污染（carryover）的風險，敘述正確。
NASBA 核心特性
| 項目 | 內容 |
|---|
| 反應溫度 | 等溫（約41°C），不需熱循環儀 |
| 主要酵素 | 反轉錄酶、RNase H、T7 RNA聚合酶 |
| 模板 | 以RNA為主，對RNA高度專一 |
| 定量方式 | real-time NASBA以molecular beacon螢光定量 |
C選項把NASBA說成需靠DNase去除DNA以防偽陽性，混淆了NASBA本身對RNA的高度專一性。NASBA以RNA為模板、等溫進行，對雙股DNA擴增極弱，並非靠DNase維持專一性，是典型把技術特性反說的陷阱。
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