專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學(包括寄生蟲學)104 年第 48 題單選題
下列關於單股結構多型性(Single-strand conformation polymorphism, SSCP)的敘述,何者錯誤?
A需要先做PCR放大
B使用非變性(Nondenatured)PAGE分析
C需要先與標準片段進行雜交正確答案
D易受分析DNA中的GC含量影響
C正確答案
SSCP 是利用單股 DNA 因序列不同折疊成不同立體構型,在非變性膠中跑出位置差異來偵測突變,不需要與標準片段雜交。
為什麼答案是 C
錯誤!SSCP 不需與標準片段雜交,這是本題答案。雜交是 Southern blot、ASO probe 等技術的特徵;SSCP 純粹比較單股 DNA 因序列差異折疊出的構型在膠上的位置。
載入中…
完整詳解
Pro · 無限重點 SSCP 是利用單股 DNA 因序列不同折疊成不同立體構型,在非變性膠中跑出位置差異來偵測突變,不需要與標準片段雜交。
SSCP = Single-Strand Conformation Polymorphism,靠「構型」差異而非「雜交」。看到雜交就刪。
逐選項分析
A✕
SSCP 標準流程必須先 PCR 擴增目標片段(通常 < 300 bp),再變性成單股後跑膠。此敘述正確。
B✕
必須使用非變性 PAGE,因為要保留單股 DNA 的折疊立體構型;若用變性膠,所有單股都被拉直就無法區分。此敘述正確。
C✓ 正確
錯誤!SSCP 不需與標準片段雜交,這是本題答案。雜交是 Southern blot、ASO probe 等技術的特徵;SSCP 純粹比較單股 DNA 因序列差異折疊出的構型在膠上的位置。
D✕
GC 含量會影響單股 DNA 的折疊穩定度與分子內氫鍵形成,進而影響構型與電泳遷移率,因此 GC 含量確實會影響 SSCP 結果。此敘述正確。
SSCP 流程與原理速記
| 步驟 | 操作 | 目的 | 關鍵點 |
|---|
| 1. PCR | 擴增目標片段 | 獲得足量 DNA | 片段 < 300 bp 最佳 |
| 2. 變性 | 加熱 + 甲醯胺 | 雙股分離為單股 | 破壞氫鍵 |
| 3. 折疊 | 迅速冷卻 | 單股形成立體構型 | 序列決定構型 |
| 4. 電泳 | 非變性 PAGE | 依構型分離 | 突變→不同位置 |
| 5. 染色 | 銀染或螢光 | 顯影條帶 | 比對野生型 |
本題陷阱在「雜交」二字。考生看到分子檢驗就反射想到 probe 雜交,但 SSCP 屬於「構型分析」而非「序列雜交」技術,全程不需任何探針。記住:SSCP 的核心是『折疊』不是『配對』。
醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學(包括寄生蟲學) 相關題目