專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學（包括寄生蟲學）104 年第 58 題單選題
下列何種分子檢驗方法不能用於細菌菌種鑑定？
APCR-restriction fragment length polymorphism（PCR-RFLP）
BRandom amplified polymorphic DNA（RAPD）assay
CPlasmid analysis正確答案
DOligonucleotide probe hybridization
C正確答案
細菌「菌種鑑定」需針對染色體保守序列；plasmid 屬可變遺傳元件，只能做菌株分型不能鑑定種別。
為什麼答案是 C
Plasmid analysis 分析質體大小與數量，但質體為染色體外可移動元件，會於不同菌株間轉移、得失，同種菌可有不同質體圖譜，僅能用於流行病學追蹤，不能鑑定菌種。
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完整詳解
Pro · 無限重點 細菌「菌種鑑定」需針對染色體保守序列；plasmid 屬可變遺傳元件，只能做菌株分型不能鑑定種別。
看到「菌種鑑定」想保守序列(16S rRNA)；plasmid 會得失變動，僅能做流行病學「菌株 typing」。
逐選項分析
A✕
PCR-RFLP 先擴增保守基因(如 16S rRNA)，再以限制酶切割產生種特異性圖譜，可有效鑑定菌種，是常用分子鑑定法。
B✕ 陷阱
RAPD 用隨機引子擴增基因組產生指紋圖譜，雖主要用於菌株分型(typing)，但不同菌種圖譜差異大，仍可作為菌種鑑別輔助。
C✓ 正確
Plasmid analysis 分析質體大小與數量，但質體為染色體外可移動元件，會於不同菌株間轉移、得失，同種菌可有不同質體圖譜，僅能用於流行病學追蹤，不能鑑定菌種。
D✕
Oligonucleotide probe hybridization 以種特異性寡核苷酸探針雜交目標基因(如 16S rRNA)，是分子鑑定菌種的經典方法。
細菌分子檢驗方法用途比較
| 方法 | 標的 | 主要用途 | 可否鑑種 |
|---|
| PCR-RFLP | 16S rRNA 等保守基因 | 菌種鑑定 | ✓ |
| RAPD | 全基因組隨機片段 | 菌株分型為主 | △ |
| Plasmid analysis | 質體 | 流行病學追蹤 | ✗ |
| Probe hybridization | 種特異序列 | 菌種鑑定 | ✓ |
| 16S rRNA sequencing | 16S rRNA 全序列 | 菌種鑑定金標準 | ✓ |
考生易誤以為「能分析 DNA 就能鑑種」。但質體屬可移動遺傳元件，會在菌株間水平轉移或丟失，同一菌種可帶不同質體、不同菌種也可帶相同質體，因此 plasmid analysis 只能做「菌株分型」不能做「菌種鑑定」。
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