專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學（包括寄生蟲學）107 年第 46 題單選題
下列何種偵測 single nucleotide polymorphism（SNP）的方法通常不需經電泳或層析儀分析？
APCR-RFLP
BSingle-strand conformation polymorphism
CHeteroduplex mobility analysis
DPCR-allele-specific oligonucleotide hybridization正確答案
D正確答案
ASO 雜交法直接靠探針專一性結合判讀 SNP，不需電泳分離產物，故為正解 D。
為什麼答案是 D
ASO hybridization（如 dot blot / reverse line blot）以對偶基因專一性寡核苷酸探針直接與目標序列雜交，靠呈色或螢光訊號判讀有無結合，不需經電泳或層析分離，故為正解。
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完整詳解
Pro · 無限重點 ASO 雜交法直接靠探針專一性結合判讀 SNP，不需電泳分離產物，故為正解 D。
看到「需分離大小或構形差異」的方法（RFLP、SSCP、HMA）都要電泳；唯獨雜交點墨法靠探針判讀，不用電泳。
逐選項分析
A✕
PCR-RFLP 是先 PCR 再用限制酶切割，需依切割後片段大小差異判讀，必須經電泳分析才能看到帶型差異，因此需要電泳。
B✕ 陷阱
SSCP 利用單股 DNA 因序列差異形成不同二級構形，在非變性膠中移動速率不同，必須以電泳分離才能偵測構形變化，需電泳。
C✕ 陷阱
HMA 利用異質雙股 DNA 因錯配造成移動速率改變，仍需在膠體中以電泳分離同質與異質雙股，方能判讀，需電泳。
D✓ 正確
ASO hybridization（如 dot blot / reverse line blot）以對偶基因專一性寡核苷酸探針直接與目標序列雜交，靠呈色或螢光訊號判讀有無結合，不需經電泳或層析分離，故為正解。
SNP 偵測方法是否需電泳
| 方法 | 原理 | 是否需電泳/層析 | 判讀依據 |
|---|
| PCR-RFLP | 限制酶切割後片段大小 | 需要 | 帶型大小 |
| SSCP | 單股 DNA 構形差異 | 需要 | 移動速率 |
| HMA | 異質雙股錯配 | 需要 | 移動速率 |
| ASO hybridization | 專一性探針雜交 | 不需要 | 訊號有無 |
SSCP 與 HMA 都是「靠移動速率差異」的方法，極易被誤以為免電泳；但它們恰恰必須靠電泳分離才能顯現差異。真正免電泳的是靠探針專一性雜交呈色的 ASO，務必分清「分離型」與「訊號型」。
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