專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學(包括寄生蟲學)107 年第 45 題單選題
下列何種方法可用於檢測兩個蛋白質之間的結合?
AChromatin immunoprecipitation
BYeast two-hybrid assay正確答案
CFluorescence in situ hybridization
DcDNA microarray
B正確答案
偵測蛋白質-蛋白質交互作用的經典方法是酵母雙雜交系統(Yeast two-hybrid),透過誘餌與獵物蛋白結合活化報導基因。
為什麼答案是 B
酵母雙雜交利用轉錄因子的 DNA 結合區(BD)與活化區(AD)分開接在兩個蛋白上,若兩蛋白結合則重組功能性轉錄因子,活化報導基因表現,是偵測蛋白質交互作用的標準方法。
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完整詳解
Pro · 無限重點 偵測蛋白質-蛋白質交互作用的經典方法是酵母雙雜交系統(Yeast two-hybrid),透過誘餌與獵物蛋白結合活化報導基因。
看到「兩個蛋白質結合」→ Yeast two-hybrid。其他三者都是核酸層次的偵測。
逐選項分析
A✕ 陷阱
ChIP(染色質免疫沉澱)是偵測「蛋白質與 DNA」的結合,例如轉錄因子結合在哪段基因序列上。雖然也用抗體抓蛋白,但對象是 DNA 不是另一個蛋白質,易混淆。
B✓ 正確
酵母雙雜交利用轉錄因子的 DNA 結合區(BD)與活化區(AD)分開接在兩個蛋白上,若兩蛋白結合則重組功能性轉錄因子,活化報導基因表現,是偵測蛋白質交互作用的標準方法。
C✕
FISH(螢光原位雜交)是用螢光探針與染色體上特定 DNA 序列雜交,用於偵測基因位置、套數或染色體異常,完全屬於核酸層次,與蛋白質結合無關。
D✕
cDNA microarray(cDNA 微陣列)用於大規模偵測 mRNA 表現量,是基因表現分析工具,屬於核酸雜交技術,無法檢測蛋白質之間的結合。
分子檢測方法偵測對象速記
| 方法 | 偵測對象 | 原理 | 用途 |
|---|
| Yeast two-hybrid | 蛋白-蛋白 | BD/AD 重組活化報導基因 | 蛋白交互作用 |
| ChIP | 蛋白-DNA | 抗體免疫沉澱抓 DNA | 轉錄因子結合位 |
| FISH | DNA-探針 | 螢光原位雜交 | 染色體/基因定位 |
| cDNA microarray | mRNA-探針 | 大量核酸雜交 | 基因表現量 |
ChIP 與 Yeast two-hybrid 都涉及「蛋白質結合」,但 ChIP 是蛋白與 DNA,Y2H 才是蛋白與蛋白。題目問的是「兩個蛋白質之間」,要鎖定 B。FISH、microarray 則純屬核酸雜交,更不相關。
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