專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學（包括寄生蟲學）106 年第 51 題單選題
檢測鐮刀型貧血的β-globin基因，設計的兩條探針分別與正常及突變後的基因序列完全互補，再利用雜交的方式分析是同型合子或異型合子，則此種檢驗方式為下列何者？
A原位螢光雜交（Fluorescence in situ hybridization, FISH）
B等位基因特異性寡核苷酸雜交（Allele-specific oligonucleotide hybridization, ASO）正確答案
C突變分辨聚合酶連鎖反應（Mutagenically separated polymerase chain reaction, MS-PCR）
D異源雜合雙鏈分析法（Heteroduplex analysis）
B正確答案
用兩條分別對應正常與突變序列的特異性探針進行雜交，判讀同型/異型合子，即為 ASO 雜交法。
為什麼答案是 B
ASO 設計兩條短寡核苷酸探針，一條與正常 (βA) 序列完全互補、一條與突變 (βS) 序列完全互補。雜交訊號出現在哪條，就能判斷是 AA、SS（同型合子）還是 AS（異型合子），正是鐮刀型貧血的經典檢測方式。
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完整詳解
Pro · 無限重點 用兩條分別對應正常與突變序列的特異性探針進行雜交，判讀同型/異型合子，即為 ASO 雜交法。
看到「兩條探針分別對應正常+突變、完全互補、雜交」→ 直接鎖定 ASO，這是 ASO 的招牌敘述。
逐選項分析
A✕
FISH 是用螢光標記探針偵測染色體上特定 DNA 序列的位置，常用於染色體異常（如染色體缺失、易位）的偵測，不是用來分辨單點突變的同型/異型合子。
B✓ 正確
ASO 設計兩條短寡核苷酸探針，一條與正常 (βA) 序列完全互補、一條與突變 (βS) 序列完全互補。雜交訊號出現在哪條，就能判斷是 AA、SS（同型合子）還是 AS（異型合子），正是鐮刀型貧血的經典檢測方式。
C✕ 陷阱
MS-PCR 是用兩條序列不同、長度也不同的特異性引子（不是探針）進行 PCR，靠產物長度區分等位基因。重點在「PCR 擴增 + 引子」，而非「探針雜交」，與題幹敘述的雜交方式不符。
D✕
Heteroduplex analysis 是將正常與突變 DNA 混合變性後再退火，形成不完全配對的異源雙鏈，藉電泳遷移率差異偵測突變。沒有用到「兩條特異性探針」的設計。
點突變偵測常用分子技術比較
| 技術 | 原理核心 | 工具 | 典型應用 |
|---|
| FISH | 螢光探針定位 | 螢光探針 + 染色體 | 染色體缺失/易位 |
| ASO | 兩條短探針分別對應正常/突變 | 寡核苷酸探針 | 鐮刀型貧血、單點突變 |
| MS-PCR | 不同長度引子分別擴增等位基因 | 特異性引子 | 已知點突變快篩 |
| Heteroduplex | 異源雙鏈電泳遷移率差異 | 電泳 | 未知突變篩檢 |
ASO 與 MS-PCR 都會「設計兩條對應 normal/mutant 的核酸」，學生極易混淆。關鍵分水嶺：題幹說「探針 + 雜交」就是 ASO；說「引子 + PCR 擴增、產物長度區分」才是 MS-PCR。本題明確點出『探針』與『雜交』，鎖定 B。
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