專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學(包括寄生蟲學)113 年第 57 題單選題
關於特異性寡核苷酸探針(sequence specific oligonucleotide probes, SSOP)進行HLA分型(typing)的敘述,下列何者最不適當?
A無需先以PCR放大HLA基因,檢測流程簡單正確答案
B檢體來源通常是全血或唾液
C每個探針可以結合至數種以上的HLA等位基因
D可以檢測的等位基因有限,無法測到所有的等位基因
A正確答案
SSOP法(PCR-SSOP)必須先以PCR放大HLA基因,再用序列特異性探針雜交分型,故A「無需PCR放大」最不適當。
為什麼答案是 A
SSOP分型實際流程為PCR-SSOP:先以PCR放大目標HLA基因區段,再以固定的序列特異性寡核苷酸探針進行雜交判讀。故「無需先以PCR放大」是錯誤敘述,為題目要選的最不適當項。
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完整詳解
Pro · 無限重點 SSOP法(PCR-SSOP)必須先以PCR放大HLA基因,再用序列特異性探針雜交分型,故A「無需PCR放大」最不適當。
SSOP全名常為PCR-SSOP,名稱就帶PCR,一定要先放大基因,A自相矛盾即選。
逐選項分析
A✓ 正確
SSOP分型實際流程為PCR-SSOP:先以PCR放大目標HLA基因區段,再以固定的序列特異性寡核苷酸探針進行雜交判讀。故「無需先以PCR放大」是錯誤敘述,為題目要選的最不適當項。
B✕
HLA分型的DNA檢體來源確實常為全血(白血球)或唾液中的口腔黏膜細胞,由此萃取基因體DNA後進行PCR放大,敘述正確。
C✕
由於HLA等位基因多態性高,單一探針往往能與含相同序列motif的多種等位基因雜交結合,需綜合多支探針結果反推基因型,敘述正確。
D✕
SSOP使用的是預先設計、數量固定的探針組合,能涵蓋的等位基因有限,對於新發現或罕見等位基因可能無法偵測,需以定序(SBT)補強,敘述正確。
常見HLA分型方法比較
| 方法 | 是否需PCR | 原理 | 解析度 |
|---|
| PCR-SSOP | 需要 | PCR後序列特異探針雜交 | 中 |
| PCR-SSP | 需要 | 序列特異引子直接PCR | 中 |
| SBT定序 | 需要 | PCR後直接定序 | 高 |
| NGS | 需要 | 次世代定序 | 最高 |
本題為反向題,要選「最不適當」者。SSOP本質是PCR-based分型法,必須先放大基因;A卻說「無需PCR放大」與方法原理完全顛倒,是典型把先決步驟刪掉的陷阱敘述。
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