專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學（包括寄生蟲學）113 年第 55 題單選題
有關化學切割錯誤的鹼基（chemical cleavage of mismatch duplexes, CCM）檢驗方法，下列敘述何者最不適當？
A可以有效偵測點突變（point mutation）
B由切割產生的片段大小可定位出突變點的位置
C利用一對具有螢光標示的引子（primers）進行PCR，將變異的與野生型的DNA片段放大
D可以使用非變性瓊脂凝膠電泳（non-denaturing agarose gel electrophoresis）分析正確答案
D正確答案
CCM需用變性電泳（denaturing gel）分析切割後的單股片段，用非變性瓊脂凝膠無法解析，故D最不適當。
為什麼答案是 D
CCM切割後產生不同長度的單股DNA片段，須以變性聚丙烯醯胺凝膠(denaturing PAGE)精確分離。非變性瓊脂凝膠電泳解析度低、無法變性單股，不適合分析此類細微片段，故D最不適當。
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完整詳解
Pro · 無限重點 CCM需用變性電泳（denaturing gel）分析切割後的單股片段，用非變性瓊脂凝膠無法解析，故D最不適當。
CCM切割後產生的是單股DNA片段，必須用變性聚丙烯醯胺凝膠才能依大小分離，非變性瓊脂膠解析度不足。
逐選項分析
A✕
CCM專門偵測異源雙股(heteroduplex)中錯誤配對的鹼基，化學試劑(如hydroxylamine、osmium tetroxide)修飾錯配鹼基後以piperidine切割，能有效偵測點突變。敘述正確。
B✕
切割發生在錯配位置，產生的片段大小直接反映突變點與末端的距離，故可依片段長度定位突變點位置。這正是CCM的優點之一，敘述正確。
C✕
現代CCM常以螢光標示引子進行PCR，分別放大野生型與變異型DNA，再變性、再黏合形成異源雙股供化學切割分析，可取代放射性標記，敘述正確。
D✓ 正確
CCM切割後產生不同長度的單股DNA片段，須以變性聚丙烯醯胺凝膠(denaturing PAGE)精確分離。非變性瓊脂凝膠電泳解析度低、無法變性單股，不適合分析此類細微片段，故D最不適當。
CCM 化學切割錯配檢測流程重點
| 步驟 | 做法 | 目的 |
|---|
| 1. PCR放大 | 螢光/標記引子放大野生與變異DNA | 取得待測片段 |
| 2. 形成異源雙股 | 變性後再黏合 | 錯配鹼基外露 |
| 3. 化學修飾 | hydroxylamine(C)、osmium(T) | 標定錯配鹼基 |
| 4. piperidine切割 | 於修飾處斷鏈 | 產生定位片段 |
| 5. 變性電泳分析 | denaturing PAGE分離 | 依片段大小定位突變 |
題目把正確的『變性電泳分析』偷換成『非變性瓊脂凝膠電泳』。CCM切割後是單股片段需變性膠分離，考生若只看到『電泳分析』就放過，便會掉入陷阱。關鍵在『非變性瓊脂』四字。
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