專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學(包括寄生蟲學)111 年第 46 題單選題
關於等位基因特異性寡核苷酸雜交(allele-specific oligonucleotide hybridization, ASO)的敘述,下列何者最不適當?
A所使用的探針序列長度有限制,須超過20 bases正確答案
B為了提高檢測的敏感度,可以搭配PCR一起執行
C目標差異位點通常位於所設計之探針的中間位置
D目前ASO已應用在癌症檢測與親子鑑定
A正確答案
ASO探針通常為短序列(約15-20 bases),不需「超過20 bases」,A敘述最不適當。
為什麼答案是 A
ASO探針設計重點是「短」,通常約15-20 bases,使單一鹼基的錯配就能顯著影響雜交穩定度而被辨別。要求「須超過20 bases」反而不利於區分點突變,故此敘述最不適當,為本題答案。
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完整詳解
Pro · 無限重點 ASO探針通常為短序列(約15-20 bases),不需「超過20 bases」,A敘述最不適當。
反向題找錯誤!ASO探針要「短」才能靠單一鹼基差異區分,太長反而無法辨別點突變。
逐選項分析
A✓ 正確
ASO探針設計重點是「短」,通常約15-20 bases,使單一鹼基的錯配就能顯著影響雜交穩定度而被辨別。要求「須超過20 bases」反而不利於區分點突變,故此敘述最不適當,為本題答案。
B✕
ASO常先以PCR放大目標序列,增加模板數量後再進行雜交,可大幅提高靈敏度,例如PCR-ASO、反向點漬墨法等,敘述正確。
C✕
目標差異位點(如點突變)設計在探針中央位置,可使該位置的錯配對雜交穩定度造成最大影響,最容易區分正常與突變等位基因,敘述正確。
D✕
ASO技術可偵測單一鹼基差異,廣泛應用於點突變檢測、癌症基因分型、遺傳疾病及親子鑑定(SNP分型)等領域,敘述正確。
ASO雜交技術重點整理
| 項目 | 正確設計 | 原因 |
|---|
| 探針長度 | 約15-20 bases(短) | 短才能凸顯單鹼基差異 |
| 差異位點位置 | 探針中央 | 錯配影響最大、最易辨別 |
| 搭配技術 | PCR放大模板 | 提高敏感度與專一性 |
| 應用領域 | 點突變、癌症、親子鑑定 | 偵測SNP / 單鹼基差異 |
ASO探針的核心特性是「短」,越短越能靠單一鹼基錯配區分等位基因。A選項把「短」說成「須超過20 bases」,與原理相反,是常見的概念顛倒陷阱。注意這是反向題,要選最不適當者。
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