專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學（包括寄生蟲學）111 年第 59 題單選題
實體腫瘤基因突變常會受到癌組織旁邊的正常組織或是基質細胞（stroma cell）的干擾而增加檢出的難度。除了提高檢測方法的靈敏度外，利用選擇性增幅技術來提高突變的檢測率也是常見的方法；下列何種方法沒有運用到選擇性增幅的技術？
A增幅阻礙突變系統（ARMS）
B肽核酸聚合酶連鎖反應（PNA-PCR）
C特異等位基因聚合酶連鎖反應（allele-specific PCR）
D聚合酶連鎖反應-限制片段長度多型性分析（PCR-RFLP）正確答案
D正確答案
PCR-RFLP 是先將所有目標序列（含野生型與突變型）無差別增幅後，再以限制酶切割分析，並未在 PCR 階段進行「選擇性增幅」。
為什麼答案是 D
PCR-RFLP 是先無差別地將野生型與突變型序列一起增幅，之後再利用限制酶切割來辨識差異，PCR 階段並無選擇性，故為本題正解。
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完整詳解
Pro · 無限重點 PCR-RFLP 是先將所有目標序列（含野生型與突變型）無差別增幅後，再以限制酶切割分析，並未在 PCR 階段進行「選擇性增幅」。
看到「選擇性增幅」，表示在 PCR 階段就只放大突變型。PCR-RFLP 是先全部放大再切，沒有選擇性。
逐選項分析
A✕
ARMS (增幅阻礙突變系統) 利用引子 3' 端的特異性，只有在與突變序列完全互補時才會進行增幅，屬於選擇性增幅技術。
B✕
PNA-PCR 利用 PNA 探針與野生型序列強烈結合，阻斷野生型的增幅（PNA clamp），從而選擇性放大突變型，屬於選擇性增幅技術。
C✕
AS-PCR (特異等位基因 PCR) 原理同 ARMS，針對特定等位基因設計引子，只對目標突變型進行選擇性增幅。
D✓ 正確
PCR-RFLP 是先無差別地將野生型與突變型序列一起增幅，之後再利用限制酶切割來辨識差異，PCR 階段並無選擇性，故為本題正解。
突變檢測技術比較
| 技術名稱 | 增幅階段選擇性 | 原理簡述 |
|---|
| ARMS / AS-PCR | 有 | 引子 3' 端特異性配對才增幅 |
| PNA-PCR | 有 | PNA 抑制野生型增幅 (Clamp) |
| PCR-RFLP | 無 | 先全部增幅，再用限制酶切割辨識 |
考生容易將「能分辨突變的技術」與「選擇性增幅技術」混淆。PCR-RFLP 確實能分辨突變，但它的分辨步驟發生在「增幅後」的限制酶切割階段，而非在「增幅中」進行選擇。
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