專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學（包括寄生蟲學）111 年第 57 題單選題
進行雜交試驗（hybridization）時，下列何種條件最能容許探針與待測序列之鹼基配對錯誤的存在？
A低鹽類濃度、低濃度甲醯胺（formamide）、低溫
B高鹽類濃度、高濃度甲醯胺（formamide）、高溫
C高鹽類濃度、低濃度甲醯胺（formamide）、低溫正確答案
D低鹽類濃度、高濃度甲醯胺（formamide）、低溫
C正確答案
雜交嚴謹度(stringency)取決於鹽濃度、甲醯胺、溫度；低嚴謹度條件最能容忍鹼基錯配。
為什麼答案是 C
高鹽濃度、低濃度甲醯胺、低溫三者皆屬「低嚴謹度(low stringency)」條件，使不完全互補的探針與序列也能維持雜交，最能容許鹼基配對錯誤存在，為正解。
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完整詳解
Pro · 無限重點 雜交嚴謹度(stringency)取決於鹽濃度、甲醯胺、溫度；低嚴謹度條件最能容忍鹼基錯配。
要容忍錯配＝低嚴謹度＝高鹽、低甲醯胺、低溫。三條件都往「容易配對」方向走。
逐選項分析
A✕ 陷阱
低鹽會提高嚴謹度（鹽屏蔽磷酸骨架負電荷，鹽低則探針不易黏附），雖低甲醯胺與低溫降低嚴謹度，但低鹽方向錯誤，整體不是最容忍錯配的條件。
B✕
高鹽雖降低嚴謹度，但高濃度甲醯胺與高溫都大幅提高嚴謹度（破壞氫鍵、降低Tm），三者方向矛盾，是最嚴謹、最不容忍錯配的組合。
C✓ 正確
高鹽濃度、低濃度甲醯胺、低溫三者皆屬「低嚴謹度(low stringency)」條件，使不完全互補的探針與序列也能維持雜交，最能容許鹼基配對錯誤存在，為正解。
D✕ 陷阱
低溫雖降低嚴謹度，但低鹽與高甲醯胺都提高嚴謹度（甲醯胺干擾鹼基堆疊與氫鍵），整體方向不一致，不是最容忍錯配的組合。
雜交嚴謹度(stringency)三要素
| 條件 | 提高嚴謹度(嚴格配對) | 降低嚴謹度(容許錯配) |
|---|
| 鹽類濃度 | 低鹽 | 高鹽 |
| 甲醯胺(formamide) | 高濃度 | 低濃度 |
| 溫度 | 高溫 | 低溫 |
最易混淆的是鹽濃度方向：與直覺相反，是「高鹽」降低嚴謹度、容許錯配，「低鹽」反而嚴格。記法：鹽中的陽離子可中和DNA磷酸骨架負電，鹽越多越易讓兩股黏在一起，故高鹽寬鬆。甲醯胺與溫度則是越高越嚴謹。
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