專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學（包括寄生蟲學）106 年第 43 題單選題
利用化學方法合成寡核苷酸，下列敘述何者正確？
A核苷酸加入的方向是5' 到3' 端
B需要DNA polymerase的作用
C可應用於 site-directed mutagenesis正確答案
D無法以螢光物質標示
C正確答案
化學合成寡核苷酸方向是 3'→5'，不需酵素，可標螢光，廣泛用於定點突變實驗。
為什麼答案是 C
正確！化學合成可設計帶有特定突變鹼基的引子（primer），用於 site-directed mutagenesis（定點突變），這是分子生物學研究蛋白質功能、改造酵素活性的核心技術。
載入中…
完整詳解
Pro · 無限重點 化學合成寡核苷酸方向是 3'→5'，不需酵素，可標螢光，廣泛用於定點突變實驗。
記住四個關鍵字：方向反(3'→5')、不用酶、可螢光、能突變。只有 C 符合。
逐選項分析
A✕ 陷阱
化學合成寡核苷酸（亞磷醯胺法）是從 3' 端固定在固相支持物上，再依序往 5' 端延伸，方向是 3'→5'，與生物體內 DNA 聚合酶的 5'→3' 方向相反。
B✕ 陷阱
化學合成完全不需要 DNA polymerase。是利用 phosphoramidite chemistry（亞磷醯胺化學法），透過去保護、偶聯、加帽、氧化四個循環步驟自動合成，DNA 聚合酶用於體內或 PCR。
C✓ 正確
正確！化學合成可設計帶有特定突變鹼基的引子（primer），用於 site-directed mutagenesis（定點突變），這是分子生物學研究蛋白質功能、改造酵素活性的核心技術。
D✕
錯誤。化學合成過程中可在 5' 端、3' 端或內部加入螢光標記（如 FAM、HEX、TAMRA），這也是 real-time PCR 探針（TaqMan probe）和定序引子的製作基礎。
化學合成 vs 酵素合成寡核苷酸
| 項目 | 化學合成 | 酵素合成(體內/PCR) |
|---|
| 方向 | 3' → 5' | 5' → 3' |
| 催化 | 化學試劑(亞磷醯胺) | DNA polymerase |
| 長度限制 | 通常 < 200 nt | 可達數千 bp |
| 修飾標記 | 易加螢光/biotin | 受酵素限制 |
| 主要應用 | primer、probe、突變 | DNA 複製、PCR 擴增 |
最大陷阱是 A 選項的方向。學生熟記「DNA 合成是 5'→3'」，誤以為化學合成也一樣，但化學合成因固相起點在 3' 端，方向恰好相反。B 選項則考驗能否區分「化學法」與「酵素法」。
醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學（包括寄生蟲學） 相關題目
