專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學（包括寄生蟲學）105 年第 56 題單選題
下列關於核酸雜交的敘述，何者正確？
A雜交溫度一般比探針之Tm（Melting temperature）高5℃
B分析全基因的DNA探針通常比較短
C長的探針專一性比較好正確答案
D短的探針雜交的時間較長
C正確答案
核酸雜交中，探針越長 → 序列越獨特 → 專一性（specificity）越高，較不易與非目標序列亂配。
為什麼答案是 C
正解。探針越長 → 含有的特定序列組合越獨特（4^n 機率），與基因組中其他位置巧合配對的機會越低，因此「專一性（specificity）」越好，背景雜訊也越低。
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完整詳解
Pro · 無限重點 核酸雜交中，探針越長 → 序列越獨特 → 專一性（specificity）越高，較不易與非目標序列亂配。
口訣：「長探針→專一好、短探針→雜交快」。雜交溫度應比 Tm 低 5-10°C 才能形成穩定雙股。
逐選項分析
A✕ 陷阱
雜交溫度應「低於」Tm 約 5-10°C，而非高於。若高於 Tm，雙股會解離（denature），根本無法形成穩定雜交。方向講反了是經典陷阱。
B✕
分析全基因組（whole genome）的 DNA 探針通常較「長」（例如 cDNA probe、genomic probe 數百至上千 bp），才能涵蓋足夠序列資訊。短探針（oligo probe）多用於偵測單一位點或 SNP。
C✓ 正確
正解。探針越長 → 含有的特定序列組合越獨特（4^n 機率），與基因組中其他位置巧合配對的機會越低，因此「專一性（specificity）」越好，背景雜訊也越低。
D✕ 陷阱
相反！短探針因序列短、擴散快、配對快，雜交所需時間「較短」；長探針因動力學較慢且形成穩定雙股需時間，雜交時間「較長」。此選項把兩者顛倒。
長 vs 短探針比較
| 特性 | 長探針 (>100 bp) | 短探針 (Oligo, 20-50 bp) |
|---|
| 專一性 | 高 ✓ | 相對較低 |
| 雜交速度 | 較慢 | 較快 |
| 敏感度 | 高（標記位點多） | 較低 |
| 區分點突變 | 差 | 佳（可分 SNP） |
| 雜交溫度 | Tm - 25°C 左右 | Tm - 5°C 左右 |
核酸雜交最常考兩個觀念容易搞混:溫度跟長度。雜交要讓單股探針找到目標配對成雙股,溫度必須低於 Tm,太高會解離;探針越長,序列越不重複,專一性越高,但雜交速度反而變慢。考選部愛把這兩組方向顛倒:把「低於 Tm」改成「高於 Tm」、把「短探針快」改成「長探針快」。判斷關鍵:雜交=配對=降溫;長=特異=慢,短=亂配=快。記住「配對要冷、長的挑剔」就不會錯。
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