專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學(包括寄生蟲學)106 年第 56 題單選題
下列何種雜交的方式不是屬於固態雜交(Solid-phase hybridization)?
ADot-blot
BMicroarray
CIn situ hybridization
DHigh-resolution melting正確答案
D正確答案
固態雜交需把核酸固定在固體支撐物上;HRM 是溶液中的熔解曲線分析,屬液態反應。
為什麼答案是 D
High-resolution melting(HRM)是 PCR 後直接在反應管中緩慢升溫,偵測雙股 DNA 解離的螢光變化,全程在液相完成,屬液態雜交(solution hybridization)。
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完整詳解
Pro · 無限重點 固態雜交需把核酸固定在固體支撐物上;HRM 是溶液中的熔解曲線分析,屬液態反應。
看「是否把 DNA/RNA 黏在膜、玻片、晶片上」→ 沒固定 = 不是固態雜交。HRM 全程在試管液體中跑。
逐選項分析
A✕
Dot-blot 將 DNA/RNA 點在硝化纖維膜或尼龍膜上,再以標記探針雜交,是典型固態雜交。
B✕
Microarray(基因晶片)將數萬條探針固定在玻片或矽晶片上,與樣本雜交後讀取訊號,標準固態雜交平台。
C✕ 陷阱
In situ hybridization 在組織切片或細胞抹片上原位進行雜交,玻片即為固體支撐物,仍屬固態雜交。易被誤認為「特殊」而誤選。
D✓ 正確
High-resolution melting(HRM)是 PCR 後直接在反應管中緩慢升溫,偵測雙股 DNA 解離的螢光變化,全程在液相完成,屬液態雜交(solution hybridization)。
雜交技術固態 vs 液態速查
| 技術 | 支撐物 | 類型 | 用途 |
|---|
| Dot/Slot blot | 膜(nylon/NC) | 固態 | 定性篩檢 |
| Southern/Northern blot | 膜 | 固態 | DNA/RNA 偵測 |
| Microarray | 玻片/晶片 | 固態 | 大規模基因表現 |
| In situ hybridization | 玻片切片 | 固態 | 原位定位 |
| HRM | PCR 反應液 | 液態 | SNP/突變掃描 |
| Real-time PCR probe | 反應液 | 液態 | 定量偵測 |
考生看到 HRM 有「melting」會聯想到 DNA 變性結合,誤以為也是雜交。但 HRM 重點在「解離」而非「結合到固體上」,且整個反應在 PCR 管液體中完成,沒有任何固體支撐物,因此屬液態反應。
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