專技高考-醫事檢驗師臨床血清免疫學與臨床病毒學104 年第 45 題單選題
進行Nucleic acid sequence-based amplification（NASBA）檢測時會利用到下列何者進行反應？①reverse transcriptase ②RNase H ③restriction enzyme ④T7 RNA polymerse
B正確答案
NASBA 是等溫 RNA 擴增技術，需 reverse transcriptase、RNase H、T7 RNA polymerase 三種酵素，不需要限制酶。
為什麼答案是 B
正確組合：①reverse transcriptase 將 RNA 轉成 cDNA；②RNase H 降解 RNA-DNA 雜合體中的 RNA；④T7 RNA polymerase 大量產生 RNA 拷貝。三酵素於 41°C 等溫循環。
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完整詳解
Pro · 無限重點 NASBA 是等溫 RNA 擴增技術，需 reverse transcriptase、RNase H、T7 RNA polymerase 三種酵素，不需要限制酶。
看到「restriction enzyme（限制酶）」直接刪除！NASBA 是擴增不是切割，限制酶是分子選殖用的。
逐選項分析
A✕ 陷阱
包含 ③restriction enzyme 錯誤。限制酶是切 DNA 用於選殖，與 NASBA 擴增反應無關。
B✓ 正確
正確組合：①reverse transcriptase 將 RNA 轉成 cDNA；②RNase H 降解 RNA-DNA 雜合體中的 RNA；④T7 RNA polymerase 大量產生 RNA 拷貝。三酵素於 41°C 等溫循環。
C✕
缺少最關鍵的 ①reverse transcriptase，且誤含 ③restriction enzyme。沒有反轉錄酶就無法將 RNA 轉成 cDNA 起始反應。
D✕
缺少 ②RNase H，且誤含 ③restriction enzyme。沒有 RNase H 移除 RNA 模板，第二股 cDNA 無法合成。
NASBA 三酵素分工
| 酵素 | 功能 | 階段 | 備註 |
|---|
| Reverse transcriptase (AMV-RT) | RNA→cDNA、cDNA→dsDNA | 起始與延伸 | 提供反轉錄活性 |
| RNase H | 降解 RNA/DNA 雜合體中的 RNA | 中段 | 讓單股 cDNA 露出 |
| T7 RNA polymerase | 從 T7 promoter 大量轉錄 RNA | 擴增放大 | 產物為 antisense RNA |
選項用 restriction enzyme（限制酶）混淆 RNase H。兩者都「切核酸」但目的完全不同：限制酶切特定序列 dsDNA 用於選殖；RNase H 切 RNA-DNA 雜合體中的 RNA 才是 NASBA 必備。看到擴增題出現限制酶要警覺。 
