專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學(包括寄生蟲學)104 年第 56 題單選題
南方墨點法之探針,其序列為5'-GGACCGTAAGCATCTAGGTCG-3',此探針的melting point(Tm值)大約是多少℃?
C正確答案
DNA 探針 Tm 值用 Wallace rule 計算:Tm = 4×(G+C) + 2×(A+T),21-mer 探針算出 66°C。
為什麼答案是 C
正解。序列 5'-GGACCGTAAGCATCTAGGTCG-3' 共 21 個鹼基:G+C = 12 個(G:7、C:5),A+T = 9 個(A:5、T:4)。Tm = 4×12 + 2×9 = 48 + 18 = 66°C。
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完整詳解
Pro · 無限重點 DNA 探針 Tm 值用 Wallace rule 計算:Tm = 4×(G+C) + 2×(A+T),21-mer 探針算出 66°C。
短探針 Tm 速算公式:Tm = 4×(G+C) + 2×(A+T)。先數 GC 數量再乘 4,AT 數量乘 2 相加即可。
逐選項分析
A✕
55°C 算錯了。若誤把 GC 與 AT 比例算反,或用其他公式估算才會得到此值。本題序列 GC 含量高達 12 個,Tm 不會這麼低。
B✕ 陷阱
60°C 是常見陷阱值,若把 GC 數量誤算為 10 個(實際 12 個),會得 4×10 + 2×11 = 62,仍非 60。考生易因數錯鹼基而選此。
C✓ 正確
正解。序列 5'-GGACCGTAAGCATCTAGGTCG-3' 共 21 個鹼基:G+C = 12 個(G:7、C:5),A+T = 9 個(A:5、T:4)。Tm = 4×12 + 2×9 = 48 + 18 = 66°C。
D✕
72°C 是 Taq polymerase 延伸反應的最佳溫度,常出現在 PCR 程序中,與探針 Tm 計算無關,屬於概念混淆。
DNA 探針 Tm 計算(Wallace rule)
| 鹼基 | 數量 | 係數 | 貢獻 Tm |
|---|
| G | 7 | ×4 | 28 |
| C | 5 | ×4 | 20 |
| A | 5 | ×2 | 10 |
| T | 4 | ×2 | 8 |
| 合計 | 21-mer | — | 66°C |
本題陷阱在於:(1) 容易數錯 G+C 與 A+T 數量;(2) 易與 PCR 三步驟溫度(變性 95°C、黏合 Tm-5°C、延伸 72°C)混淆。記得 Tm 是「探針本身」的解離溫度,與 polymerase 工作溫度無關。
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