專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學（包括寄生蟲學）104 年第 57 題單選題
有關spoligotyping細菌基因分型的方法，下列敘述何者正確？
A只量測direct repeat序列的長度
B只量測direct repeat及spacer序列長度
C量測direct repeat及spacer序列長度，並進行direct repeat序列雜交
D量測direct repeat及spacer序列長度，並進行spacer序列雜交正確答案
D正確答案
Spoligotyping 是分析結核菌 DR 區的 spacer 變異，PCR 擴增後與已知 spacer 探針雜交來分型。
為什麼答案是 D
正確。Spoligotyping 利用 DR 區內 PCR 擴增後，與膜上 43 條已知 spacer 探針雜交，依 spacer 有無形成獨特 pattern 進行結核菌分型。
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完整詳解
Pro · 無限重點 Spoligotyping 是分析結核菌 DR 區的 spacer 變異，PCR 擴增後與已知 spacer 探針雜交來分型。
關鍵字：spacer 雜交。DR 是保守序列當骨架，真正用來分型的是 spacer 的有無。
逐選項分析
A✕
DR (direct repeat) 是 36 bp 的保守重複序列，本身不具分型鑑別力，僅量測長度無法區分菌株。
B✕
Spoligotyping 不是單純量長度的方法，而是以 PCR + 雜交方式檢測 spacer 是否存在，量長度無法判讀 spacer pattern。
C✕ 陷阱
雜交對象搞反了。DR 是大家都有的保守序列，拿來雜交沒有區別力；真正要雜交的是會缺失/存在的 spacer。
D✓ 正確
正確。Spoligotyping 利用 DR 區內 PCR 擴增後，與膜上 43 條已知 spacer 探針雜交，依 spacer 有無形成獨特 pattern 進行結核菌分型。
Spoligotyping 操作流程
| 步驟 | 操作 | 目的 | 原理 |
|---|
| 1. PCR | 以 DR 為引子擴增 | 放大 DR 區 | DR 為保守序列 |
| 2. 雜交 | 與 43 條 spacer 探針 | 檢測 spacer 有無 | spacer 具多型性 |
| 3. 判讀 | 黑點 pattern | 建立菌株指紋 | 形成獨特 spoligotype |
| 4. 比對 | 對照資料庫 | 菌株分型/流行病學 | 如 Beijing family |
本題陷阱在於 C、D 都提到「雜交」，差別只在雜交對象。考生若不熟原理容易誤選 C。記住口訣：「DR 當骨架擴增，Spacer 當探針雜交」，DR 是保守的不能分型，spacer 才是真正的指紋。
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