專技高考-醫師(一)醫學(一)(包括生物化學、解剖學、胚胎及發育生物學、組織學、生理學等科目知識及其臨床之應用)112 年第 74 題單選題
蛋白質純化方法中的膠體過濾層析法(gel filtration chromatography),是根據不同蛋白質之間何項物理化學特性的差異達成分離效果?
A電性高低(charge)
B分子大小(molecular size)正確答案
C質荷比高低(mass-to-charge ratio)
D穩定程度(stability)
B正確答案
膠體過濾層析法(又稱分子篩層析)依『分子大小』分離蛋白質,大分子先洗出、小分子卡在膠珠孔洞中最後出來。
為什麼答案是 B
膠體過濾層析又稱 size exclusion chromatography,膠珠有孔洞,小分子進入孔洞路徑長、後洗出;大分子無法進入、直接穿過而先洗出,靠分子大小差異分離。
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完整詳解
Pro · 無限重點 膠體過濾層析法(又稱分子篩層析)依『分子大小』分離蛋白質,大分子先洗出、小分子卡在膠珠孔洞中最後出來。
看到 gel filtration = size exclusion = 分子大小,直接選 B。
逐選項分析
A✕ 陷阱
依電性分離的是離子交換層析法(ion exchange chromatography),利用帶電基團吸附相反電性蛋白質,與膠體過濾無關。
B✓ 正確
膠體過濾層析又稱 size exclusion chromatography,膠珠有孔洞,小分子進入孔洞路徑長、後洗出;大分子無法進入、直接穿過而先洗出,靠分子大小差異分離。
C✕ 陷阱
質荷比(m/z)是質譜儀(mass spectrometry)或 SDS-PAGE 電泳的分離依據,非層析法原理。
D✕
穩定程度(如熱穩定性)可用於部分純化策略(如熱變性沉澱),但不是任何一種層析法的分離依據。
蛋白質純化層析法四大類對照
| 方法 | 分離依據 | 原理 | 關鍵字 |
|---|
| 膠體過濾層析 (Gel filtration) | 分子大小 | 大分子先出、小分子後出 | size exclusion |
| 離子交換層析 (Ion exchange) | 電性 | 帶電樹脂吸附相反電性蛋白 | charge |
| 親和性層析 (Affinity) | 專一結合力 | 配體與目標蛋白專一結合 | ligand binding |
| 疏水性層析 (HIC) | 疏水性 | 疏水區與疏水樹脂作用 | hydrophobicity |
層析法核心就是「靠什麼性質卡住蛋白質」:膠體過濾純粹看體積大小,膠珠上有固定孔徑,小分子鑽進去繞路、大分子直接穿過去先出來;離子交換則是靠電荷吸附在樹脂上,要用鹽濃度梯度才能洗下來。考生最容易搞混這兩種管柱法,關鍵判斷是「有沒有提到電荷或鹽」——沒有就是單純物理篩選,gel filtration 字面上的 filter 其實就是過濾網概念。
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