專技高考-醫事檢驗師生物化學與臨床生化學107 年第 11 題單選題
利用biuret method定量蛋白質時，需要下列那一種離子？
B正確答案
Biuret法定量蛋白質的關鍵是銅離子(Cu2+)在鹼性環境下與肽鍵結合形成紫色錯合物。
為什麼答案是 B
正解。Biuret試劑含硫酸銅(CuSO4)，在強鹼(NaOH)環境下，Cu2+與蛋白質中至少兩個以上的肽鍵配位螯合，形成紫色錯合物，吸光度與蛋白質濃度成正比。
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完整詳解
Pro · 無限重點 Biuret法定量蛋白質的關鍵是銅離子(Cu2+)在鹼性環境下與肽鍵結合形成紫色錯合物。
記憶口訣：Biuret = Blue copper（銅藍色錯合物），看到蛋白質定量的紫色反應就想Cu2+。
逐選項分析
A✕ 陷阱
Ca2+常見於血鈣檢測或某些酵素活化，但與biuret反應無關。biuret法靠的是銅離子與肽鍵的螯合，鈣離子不會產生紫色錯合物。
B✓ 正確
正解。Biuret試劑含硫酸銅(CuSO4)，在強鹼(NaOH)環境下，Cu2+與蛋白質中至少兩個以上的肽鍵配位螯合，形成紫色錯合物，吸光度與蛋白質濃度成正比。
C✕
Mg2+是許多酵素（如激酶、ATP相關反應）的輔因子，但biuret反應不需要鎂離子，無法與肽鍵形成顯色錯合物。
D✕
Zn2+是碳酸酐酶、羧肽酶等金屬酶的輔因子，但與biuret蛋白質定量法無關，不會產生紫色顯色反應。
常見蛋白質定量法比較
| 方法 | 關鍵試劑/離子 | 顯色 | 靈敏度 |
|---|
| Biuret法 | Cu2+ + NaOH | 紫色 | 低（需高濃度） |
| Lowry法 | Cu2+ + Folin試劑 | 藍色 | 中高 |
| BCA法 | Cu1+ + BCA | 紫色 | 高 |
| Bradford法 | Coomassie染料 | 藍色 | 高 |
考生易把各種金屬離子的輔因子角色搞混。Mg2+(激酶)、Zn2+(碳酸酐酶)、Ca2+(凝血)都是常見輔因子，但biuret法專靠Cu2+與肽鍵螯合顯色，與酵素輔因子角色無關。 
