專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學(包括寄生蟲學)108 年第 46 題單選題
單股結構多型性(Single-strand conformation polymorphism, SSCP)需要進行下列何種電泳?
A非變性聚丙烯醯胺凝膠電泳(Non-denatured PAGE)正確答案
B變性聚丙烯醯胺凝膠電泳(Denatured PAGE)
C非變性瓊脂膠體電泳(Non-denatured agarose gel electrophoresis)
D變性瓊脂膠體電泳(Denatured agarose gel electrophoresis)
A正確答案
SSCP 利用單股 DNA 在非變性條件下因序列差異折疊成不同二級結構,產生電泳遷移率差異,故須用非變性 PAGE。
為什麼答案是 A
正解。SSCP 先將 DNA 變性成單股後,於非變性 PAGE 中跑膠,使單股自行折疊成立體構型。單一鹼基差異就會造成構型不同、遷移率改變,常用於偵測點突變。
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完整詳解
Pro · 無限重點 SSCP 利用單股 DNA 在非變性條件下因序列差異折疊成不同二級結構,產生電泳遷移率差異,故須用非變性 PAGE。
關鍵字:『conformation(構型)』→ 必須保留二級結構 → 不能變性 → 選非變性 PAGE。
逐選項分析
A✓ 正確
正解。SSCP 先將 DNA 變性成單股後,於非變性 PAGE 中跑膠,使單股自行折疊成立體構型。單一鹼基差異就會造成構型不同、遷移率改變,常用於偵測點突變。
B✕ 陷阱
錯誤。若使用變性 PAGE,單股 DNA 會被拉直無法形成二級結構,遷移率僅取決於分子量,無法區分序列差異,SSCP 失去意義。
C✕
錯誤。瓊脂膠解析度過低,無法分辨僅因構型微小差異造成的遷移率變化。SSCP 需要高解析度的 PAGE 才能偵測單一鹼基突變。
D✕
錯誤。同時犯了兩個錯:變性條件破壞構型、瓊脂膠解析度不足,完全不適用於 SSCP 分析。
SSCP 操作四步驟
| 步驟 | 操作 | 目的 | 關鍵 |
|---|
| 1 | PCR 擴增目標片段 | 獲得足量 DNA | 片段宜 < 300 bp |
| 2 | 加熱變性 + 急速冷卻 | 雙股拆成單股並折疊 | 形成獨特二級結構 |
| 3 | 非變性 PAGE 電泳 | 依構型分離 | 保持折疊狀態 |
| 4 | 染色判讀條帶位置 | 比對野生型與突變型 | 遷移率差異 = 序列差異 |
考生常被『SSCP 要先變性 DNA』誤導而選變性 PAGE。重點在於:DNA 變性是『樣品前處理』,但跑膠時必須在『非變性條件』下進行,才能讓單股折疊出特殊構型,這正是 SSCP 命名『conformation』的精髓。
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