專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學（包括寄生蟲學）108 年第 45 題單選題
關於heteroduplex migration analysis之敘述，下列何者正確？
ASample需經restriction enzyme digestion
BSample需經denaturation、renaturation等步驟正確答案
CSample需經probe hybridization
D用於偵測SNP時，其片段大小不能大於300 bp
B正確答案
Heteroduplex analysis 必經變性與再黏合，使突變序列與野生型形成不匹配雙股，於電泳遷移率上呈現差異。
為什麼答案是 B
正確。將野生型與待測 PCR 產物混合後加熱 denature，再緩慢冷卻 renature，使兩股交叉配對形成 heteroduplex；若有突變/SNP，雙股會出現 mismatch bubble，電泳遷移率減慢可被偵測。
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完整詳解
Pro · 無限重點 Heteroduplex analysis 必經變性與再黏合，使突變序列與野生型形成不匹配雙股，於電泳遷移率上呈現差異。
看到 heteroduplex 就想「兩股不同來源的 DNA 黏一起」→ 必須先 denature 再 renature，秒選 B。
逐選項分析
A✕ 陷阱
Restriction enzyme digestion 是 RFLP 的步驟，不是 heteroduplex analysis。Heteroduplex 不需切割，只需把兩個 PCR 產物混合變性再退火。
B✓ 正確
正確。將野生型與待測 PCR 產物混合後加熱 denature，再緩慢冷卻 renature，使兩股交叉配對形成 heteroduplex；若有突變/SNP，雙股會出現 mismatch bubble，電泳遷移率減慢可被偵測。
C✕
Probe hybridization 是 Southern blot、FISH、ASO 等技術的步驟。Heteroduplex 是 PCR 產物互相配對，不需外加 probe。
D✕ 陷阱
片段大小限制是 SSCP（單股構型多型性分析）的特性（一般 <300 bp 較佳），不是 heteroduplex analysis。Heteroduplex 可分析較大片段（可達 1 kb 左右）。
突變偵測技術比較
| 技術 | 原理 | 關鍵步驟 | 片段限制 |
|---|
| Heteroduplex | mismatch 造成電泳遷移差 | denature + renature | 可至 1 kb |
| SSCP | 單股二級結構差異 | denature 後跑單股電泳 | <300 bp |
| RFLP | 限制酶切點變化 | restriction enzyme digestion | 視酶而定 |
| ASO | 等位基因特異探針雜交 | probe hybridization | 短片段 |
本題四個選項分別對應四種不同分子檢驗技術的步驟。考選部最愛把 RFLP、SSCP、ASO 的特徵混入 heteroduplex 題目中誘答，特別是 D 選項的「<300 bp」是 SSCP 限制，最容易誤選。
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