專技高考-醫師(一)醫學(一)(包括生物化學、解剖學、胚胎及發育生物學、組織學、生理學等科目知識及其臨床之應用)109 年第 100 題單選題
將重組 DNA 進行基因定點突變( site-directed mutagenesis )之過程,不需要下列何者?
A反轉錄酶( reverse transcriptase )正確答案
BDNA 聚合酶( DNA polymerase )
Cdeoxyribonucleoside triphosphate
D突變的引子( mutated primers )
A正確答案
定點突變用 PCR-like 技術在 DNA 模板上擴增,不需反轉錄酶(那是 RNA→DNA 才要)。
為什麼答案是 A
反轉錄酶是將 RNA 反轉錄成 cDNA 所需的酵素。定點突變的模板本身就是重組 DNA,不涉及 RNA 轉換,故不需要反轉錄酶。此為正解。
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完整詳解
Pro · 無限重點 定點突變用 PCR-like 技術在 DNA 模板上擴增,不需反轉錄酶(那是 RNA→DNA 才要)。
看到「重組 DNA」就知道起始模板是 DNA,不是 RNA,反轉錄酶直接刪掉。
逐選項分析
A✓ 正確
反轉錄酶是將 RNA 反轉錄成 cDNA 所需的酵素。定點突變的模板本身就是重組 DNA,不涉及 RNA 轉換,故不需要反轉錄酶。此為正解。
B✕
DNA 聚合酶(常用高保真的 Pfu 或 Phusion)負責以突變引子為起點、沿模板延伸合成含突變的新 DNA 股,是定點突變的核心酵素。
C✕
dNTPs(dATP、dTTP、dGTP、dCTP)是 DNA 合成的原料單體,任何 DNA 聚合反應都必須提供,定點突變當然也需要。
D✕ 陷阱
突變引子是定點突變的靈魂——在引子序列中刻意設計欲突變的鹼基,延伸後即將突變帶入產物。沒有突變引子就沒有定點突變。
定點突變(Site-Directed Mutagenesis)所需要素
| 要素 | 角色 | 是否必要 | 備註 |
|---|
| 重組 DNA 模板 | 提供原始序列 | ✅ 必要 | 通常為質體 |
| 突變引子 | 攜帶欲突變的鹼基 | ✅ 必要 | 正反向皆需含突變點 |
| DNA 聚合酶 | 延伸合成新股 | ✅ 必要 | 高保真酶如 Pfu |
| dNTPs | 合成原料 | ✅ 必要 | 四種缺一不可 |
| DpnI | 切除甲基化母股 | ✅ 常用 | 區分新舊 DNA |
| 反轉錄酶 | RNA→DNA | ❌ 不需要 | 本題答案 |
考生若沒分清「反轉錄酶」與「DNA 聚合酶」的模板差異,容易誤以為兩者都能用於 DNA 合成。關鍵:反轉錄酶只從 RNA 起跑,定點突變的起始模板是 DNA,用不到它。
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