專技高考-醫事檢驗師生物化學與臨床生化學112 年第 18 題單選題
使用 Coomassie blue 檢測蛋白質時，應在下列何種情況進行？
A反應物對波長 280 nm 有特異性吸收
B反應需要銅離子
C在酸性環境下進行正確答案
D與芳香族支鏈結合成複合物
C正確答案
Coomassie blue（Bradford法）需在酸性環境下與蛋白質結合，染料在酸性下變藍並偵測 595 nm 吸光。
為什麼答案是 C
正解。Coomassie blue G-250 在酸性溶液中與蛋白質的鹼性與芳香族殘基結合後，由紅棕色轉為藍色，最大吸收波長移至 595 nm，故反應須在酸性環境（含磷酸）下進行。
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完整詳解
Pro · 無限重點 Coomassie blue（Bradford法）需在酸性環境下與蛋白質結合，染料在酸性下變藍並偵測 595 nm 吸光。
Bradford = 酸性 + 595 nm + 染料結合。看到「280 nm」「銅離子」直接排除（那是別的方法）。
逐選項分析
A✕ 陷阱
280 nm 特異性吸收是利用色胺酸、酪胺酸等芳香族胺基酸的紫外吸收，屬於 UV 直接測定法，與 Coomassie blue 染色無關，是名詞偷換陷阱。
B✕ 陷阱
需要銅離子的是 Biuret 法與 Lowry 法（雙縮脲反應，Cu²⁺ 與肽鍵作用）以及 BCA 法。Bradford/Coomassie blue 不需要銅離子。
C✓ 正確
正解。Coomassie blue G-250 在酸性溶液中與蛋白質的鹼性與芳香族殘基結合後，由紅棕色轉為藍色，最大吸收波長移至 595 nm，故反應須在酸性環境（含磷酸）下進行。
D✕ 陷阱
Coomassie blue 主要與蛋白質的鹼性胺基酸（精胺酸等）及部分芳香族殘基經靜電與疏水作用結合，描述「與芳香族支鏈結合成複合物」過於片面且非主要機制，故非最佳答案。
常見蛋白質定量法比較
| 方法 | 原理/試劑 | 需銅離子 | 偵測波長 |
|---|
| UV 280 nm | 芳香族胺基酸紫外吸收 | 否 | 280 nm |
| Biuret | 雙縮脲反應 | 是 | 540 nm |
| Lowry | Biuret + Folin 試劑 | 是 | 750 nm |
| BCA | Cu⁺ 與 BCA 螯合 | 是 | 562 nm |
| Bradford | Coomassie blue + 酸性 | 否 | 595 nm |
本題把多種蛋白質定量法的特徵混在選項中。280 nm 是 UV 法、銅離子是 Biuret/Lowry/BCA 法的特徵，刻意放進來誤導。記住 Coomassie blue（Bradford）的關鍵字是「酸性 + 595 nm + 染料結合」即可破解。 
